ssc-let-7c對(duì)豬甲狀腺細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖研究.pdf

1、MiR-let-7c是let-7家族的主要成員之一，在甲狀腺的生長發(fā)育過程中起著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過體外轉(zhuǎn)染miR-let-7c類似物探索其對(duì)豬甲狀腺細(xì)胞體外培養(yǎng)增殖的影響。首先，觀察豬甲狀腺細(xì)胞在3D條件下的生長狀況和豬甲狀腺原代及傳代細(xì)胞的形態(tài)變化，并計(jì)算細(xì)胞生長速度;然后，通過實(shí)時(shí)熒光定量(qPCR)、MTT技術(shù)檢測(cè)三組體外培養(yǎng)豬甲狀腺細(xì)胞中miR-let-7c的表達(dá)量和細(xì)胞增殖情況;最后，利用在線預(yù)測(cè)軟件miRWalk2.0對(duì)

2、miR-let-7c的靶基因及其功能進(jìn)行預(yù)測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示傳代2代后的甲狀腺細(xì)胞生長緩慢，且形態(tài)由圓逐漸變長。細(xì)胞免疫熒光鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)有明顯的綠色熒光，表明豬甲狀腺細(xì)胞功能正常。熒光定量PCR結(jié)果顯示管家基因Met-tRNA表達(dá)穩(wěn)定，轉(zhuǎn)染mimics組miR-let-7c表達(dá)量明顯高于其他兩組。利用MTT法的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)染mimics組的OD值顯著小于其他兩組(p＜0.05)。利用在線預(yù)測(cè)軟件發(fā)現(xiàn)miR-let-7c的靶基因主要聚集