GNAS基因表達(dá)與豬成纖維細(xì)胞增殖與凋亡關(guān)系的初步研究.pdf

1、G蛋白是細(xì)胞內(nèi)一類重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，可介導(dǎo)多種信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。GNAS是G蛋白的一個(gè)重要的功能亞基，在細(xì)胞中可以結(jié)合并激活腺苷酸環(huán)化酶，催化ATP轉(zhuǎn)化為cAMP，而cAMP對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂有著重要的作用。
　　 本研究通過(guò)熒光定量PCR研究金華豬GNAS基因不同生長(zhǎng)階段（胚胎期60d、80d、105d和出生后1d、25d、60d、90d、120d、150d、180d）眼肌組織中的表達(dá)譜;然后設(shè)計(jì)并合

2、成siRNA序列，對(duì)GNAS基因進(jìn)行干擾表達(dá)，檢測(cè)GNAS基因?qū)鹑A豬成纖維細(xì)胞中增殖與凋亡基因bcl-2、fas和caspase-3表達(dá)的影響;最后通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)GNAS基因進(jìn)行染色體電子定位，查詢?cè)摶蛭恢蒙系腝TL分布。并對(duì)金皮資源家系F1代個(gè)體GNAS基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測(cè)序，尋找豬GNAS基因位點(diǎn)上的突變位點(diǎn)，以分析該基因的生物學(xué)特性。
　　 結(jié)果表明，胚胎期從眼肌組織分化出到胚胎期80d，GNAS基因mRNA表

3、達(dá)逐漸升高，胚胎期80d到出生表達(dá)逐步降低，出生后1d到成年90d之間逐步升高，在120d時(shí)突然降低，之后又開始上升，到150d時(shí)表達(dá)達(dá)到最高，之后又下降，與豬的生長(zhǎng)規(guī)律相類似。GNAS基因mRNA水平表達(dá)在不同日齡間差異極顯著(P＜0.01);RNAi技術(shù)干擾細(xì)胞中GNAS基因的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，GNAS基因mRNA水平表達(dá)下調(diào)77％，同時(shí)fas、bcl-2和caspase-3三個(gè)增殖凋亡基因表達(dá)也分別下調(diào)了18％、46％和21％。應(yīng)用生物信