牙周膜成纖維細(xì)胞彈性模量與內(nèi)毒素作用關(guān)系的初步研究.pdf

1、背景與目的:牙周病是指發(fā)生在牙齒支持組織(包括牙齦、牙周膜、牙槽骨、牙骨質(zhì))的慢性、非特異性、感染性疾病。其最大的危害是導(dǎo)致罹患牙齒的松動(dòng)脫落,從而引起發(fā)音、功能和面部形態(tài)變化。人牙周膜成纖維細(xì)胞(human perio dontal ligament cell,hPDLC)是牙周組織的主要細(xì)胞,為力學(xué)敏感細(xì)胞,在牙周組織的修復(fù)改建中起很重要的作用。活細(xì)胞具有內(nèi)在的力學(xué)性質(zhì),能夠響應(yīng)外界環(huán)境的變化,通過(guò)改變自身的力學(xué)性質(zhì)來(lái)調(diào)節(jié)相應(yīng)的生物

2、過(guò)程中的狀態(tài)。細(xì)胞彈性模量是反映細(xì)胞生物力學(xué)性質(zhì)的重要參數(shù),與細(xì)胞的移動(dòng)、分化、凋亡有密切的聯(lián)系。內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細(xì)胞壁外膜中的脂多糖(lipo poly saccharide,LPS)成分,是牙周病的重要病因之一。早期關(guān)于內(nèi)毒素對(duì)牙周膜成纖維細(xì)胞的影響,多集中于內(nèi)毒素刺激牙周膜成纖維細(xì)胞后細(xì)胞因子的變化,關(guān)于內(nèi)毒素對(duì)hPDLC的力學(xué)性質(zhì)是否產(chǎn)生影響,未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本課題采用原子力顯微鏡初步觀察牙周膜成纖維細(xì)胞經(jīng)LPS作用后的彈性模量

3、變化,以期對(duì)LPS在牙周炎的致病機(jī)理有進(jìn)一步認(rèn)識(shí)。
　　方法:采用酶消化組織塊法獲取原代hPDLC,取第5-8代hPDLC用于實(shí)驗(yàn);利用AFM接觸模式對(duì)hPDLC進(jìn)行掃描成像,獲取hPDLC的超微結(jié)構(gòu)圖像;實(shí)驗(yàn)分為正常培養(yǎng)組、0.1ug/mlLPS刺激組、1ug/mlLPS刺激組、10ug/mlLPS刺激組;各實(shí)驗(yàn)組正常培養(yǎng)后加入含相應(yīng)濃度LPS的細(xì)胞培養(yǎng)液刺激細(xì)胞24小時(shí),采用10μm左右微球修飾的原子力顯微鏡探針,通過(guò)AFM獲

4、取各組hPDLC細(xì)胞核相對(duì)應(yīng)區(qū)域的力曲線,借助赫茲模型計(jì)算細(xì)胞彈性模量,通過(guò)方差分析比較各組間的差異。
　　結(jié)果:對(duì)照組、0.1μg/ml的LPS刺激組、1μg/ml的LPS刺激組、10μg/ml的LPS刺激組hPDLC彈性模量依次為1.958±0.922KPa、1.448±0.999、2.477±1.656KPa、3.654±1.926KPa。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,與對(duì)照組相比,0.1μg/ml的LPS刺激組細(xì)胞彈性模量明顯降低,1μ