小麥木聚糖酶抑制劑TAXI-Ⅰ基因克隆表達及產(chǎn)物特性研究.pdf_第1頁
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1、浙江大學碩士學位論文小麥木聚糖酶抑制劑TAXIⅠ基因克隆表達及產(chǎn)物特性研究姓名：高慧申請學位級別：碩士專業(yè)：動物營養(yǎng)與飼料科學指導教師：孫建義20060501浙江大學碩士學位論文ABSTRACTB—l，4xylanases(EC32I8)cancatalyzethehydrolysisofxylan(themajorconstituentofhemicellulose)andplayasignificantroleinnaturebyr

2、ecyclinghemicelluloseTheyarewidelyappliedinanimalfeedandfoodindustriesandinbiobleachingHoweversubstanceswhichinhibitthehydrolyticactivityofendoxylanasesincerealsaffectthefunctionalityandperformanceoftheenzymesInthisstudy

3、，theTriticumaestivumxylanaseinhibitorI(TAXI—I)wasclonedandexpressedbyEscherichiacoliBL21XylanaseinhibitoractivitiesagainstxylanasewereanalysedwithapurposetoprovideatheoreticalbasisforanaccuratescreeningofxylanaseThemainr

4、esultswereasfollows：nleTriticumaestiVumxylanaseinhibitorI(TAXII，AJ438880)geneWasclonedaccordingtosecquenceinformationinGenBankThefragmentcontainingtheTAXI—IregionwasamplifiedbyPolymeraseChainReaction(PCR)frompUCmTTAXIVec

5、torbyusingpyrobesTMDNAPolymeraseandapairofprimes51AⅪ02副3TAXl02Ewhichwey／edesignedbyanalyzingtherestrictionsitemappingofTAXIandthemultiplecloningsite(MCS)ofvectorpET30a()，sointroducingEcoRlsiteat3endandXhoIsiteat5endofthe

6、geneTheresultingPCRproduct(1175bp)wassubclonedintopUCmTVectorthepositiveclonewasdoubledigestedbyEcoRIandXhoI，theDNAinsertwasligatedintotheEcoRI一勵oIcutsiteofpET30“)，constructingrecombinantvectorpET30計)TAXIETherecombinantp

7、ET30a()TAXIEwastransformedintoEscherichiacoliBL21andtherecombinantswdteobtainedThespecificityofTAXI—Iindicatedthatxylanaseinhibitorhadamolecularweightof46。7KDaandtheactivitywasatitslowestat20℃Theinhibitoractivityascended

8、fastduring30minat20℃whileitsactivityhadnosignificantdiversificationin30minTheactivityincreasedgentlyafterbeingtreatedduringOC一70“Cfor30rainTAXIIinhibitdifferentendoxylanasestovaryingextentsHi曲inhibitionwasfoundagainstfun

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