腹腔鏡技術(shù)建立小型豬肝損傷模型及肝臟環(huán)境變化的研究.pdf

1、小型豬與人在比較醫(yī)學(xué)上同源關(guān)系較近，在解剖學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)和疾病發(fā)生機(jī)理等方面極其相似，常用作理想的非嚙齒類實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，如小型豬糖尿病模型、腹壁拉鏈模型、心肌梗死模型等，然而采用微創(chuàng)技術(shù)建立小型豬肝臟損傷模型的研究在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道，加之目前科學(xué)研究中對(duì)理想大動(dòng)物肝臟損傷模型的迫切需求，小型豬的實(shí)驗(yàn)用肝臟損傷模型已經(jīng)成為獸醫(yī)學(xué)、比較醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域亟待解決的問(wèn)題。因此，本課題將采用腹腔鏡微創(chuàng)外科技術(shù)進(jìn)行小型豬肝臟損傷模型建立的研究，探索

2、腹腔鏡下建立肝臟大部分切除及缺血合并部分切除損傷模型的操作方法，同時(shí)對(duì)模型建立的安全性進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并與傳統(tǒng)開(kāi)放性手術(shù)進(jìn)行對(duì)比研究，最后在模型基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討損傷后肝臟環(huán)境的變化。
　　本試驗(yàn)選用54頭巴馬小型豬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，首先隨機(jī)選取5頭小型豬，進(jìn)行腹腔鏡下肝臟局部術(shù)野探查和肝臟解剖學(xué)觀察，然后將剩余的小型豬隨機(jī)分為7組，每組7頭，分別為腹腔鏡肝葉大部分切除組、腹腔鏡肝葉大部分切除假手術(shù)對(duì)照組、開(kāi)腹肝葉大部分切除組，腹腔鏡肝臟缺血合

3、并部分切除組、腹腔鏡肝臟部分切除組、腹腔鏡肝臟缺血合并部分切除假手術(shù)對(duì)照組、開(kāi)腹肝臟缺血合并部分切除組。試驗(yàn)過(guò)程中通過(guò)氣腹、建立手術(shù)通路、分離韌帶、解剖第一肝門、貫穿肝實(shí)質(zhì)與止血、右半肝缺血、切斷肝實(shí)質(zhì)、沖洗腹腔、切除肝葉的取出、縫合切口等操作步驟進(jìn)行腹腔鏡下小型豬肝臟損傷模型的建立。
　　模型建立過(guò)程中對(duì)生命體征、循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、體溫等重要生理指標(biāo)進(jìn)行全程連續(xù)監(jiān)測(cè)，并記錄術(shù)中和術(shù)后并發(fā)癥、手術(shù)完成及術(shù)后恢復(fù)情況，術(shù)后30d行

4、腹腔鏡二次探查手術(shù)部位粘連。各組分別于術(shù)前、4h、1d、3d、7d、14d、30d采取靜脈血，檢測(cè)血常規(guī)和血清總蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶、r-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、總膽紅素、尿素氮、肌酐及血漿凝血功能;在術(shù)前、術(shù)后即刻、術(shù)后1d、術(shù)后3d、術(shù)后7d和術(shù)后1個(gè)月進(jìn)行腹腔鏡下肝臟活組織檢查，做石蠟切片和HE染色觀察組織病理學(xué)變化，同時(shí)針對(duì)不同模型分別檢測(cè)肝臟組織增殖細(xì)胞核抗原、細(xì)胞周期素D1、腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6的表達(dá)和組織丙二醛含量、超氧化物

5、歧化酶、過(guò)氧化氫酶活性及Caspase-3活性，統(tǒng)計(jì)并對(duì)比腹腔鏡和開(kāi)腹手術(shù)結(jié)果和血清皮質(zhì)醇、C反應(yīng)蛋白的變化。
　　腹腔鏡肝臟局部術(shù)野探查和解剖學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，小型豬肝臟解剖位置、外形結(jié)構(gòu)、韌帶分布、管道系統(tǒng)及肝葉劃分方面與人類近似，其特有的解剖學(xué)結(jié)構(gòu)便于肝臟模型的建立。
　　本試驗(yàn)成功完成了小型豬腹腔鏡下肝臟大部分切除模型和小型豬腹腔鏡下肝臟缺血合并部分切除模型的建立，術(shù)中和術(shù)后各項(xiàng)生理生化指標(biāo)雖有不同程度的波動(dòng)，但均未超出小

6、型豬的安全耐受范圍;相對(duì)于開(kāi)腹組，腹腔鏡組的手術(shù)時(shí)間稍長(zhǎng)，但手術(shù)切口小，出血量少，術(shù)后腹腔粘連輕，且所有小型豬術(shù)后1d精神狀態(tài)和食欲基本恢復(fù)，能進(jìn)食少量流質(zhì)飼料，術(shù)后7-9d套管口和腹壁切口取第一期愈合。
　　模型建立后，小型豬肝臟大部分切除模型肝臟環(huán)境變化主要表現(xiàn)為術(shù)后1d和術(shù)后3d血清AST與術(shù)前和對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)后7d差異顯著(0.01＜P＜0.05);病理學(xué)觀察可見(jiàn)術(shù)后7d局部肝細(xì)胞腫脹、變性并伴有

7、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝組織損傷較明顯;術(shù)后1d肝細(xì)胞PCNA表達(dá)水平于達(dá)到高峰，之后逐漸降低。肝臟組織Cyclin D1基因表達(dá)量在肝大部切除后早期表達(dá)明顯升高，術(shù)后1d增高明顯，與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)，一直持續(xù)到術(shù)后3d差異顯著(0.01＜P＜0.05)。術(shù)后肝組織TNF-α先升高后降低，在術(shù)后1d迅速升高到最高值，與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)后3d、7d逐漸降低，與對(duì)照組相比差異顯著(0.01＜P＜0.05)

8、，;IL-6變化幅度較小，術(shù)后1d和3d與對(duì)照組相比差異顯著(0.01＜P＜0.05)。
　　肝臟缺血合并部分切除模型肝臟環(huán)境變化主要表現(xiàn)為，與對(duì)照組相比術(shù)后1d和3d血清AST差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)后7d差異顯著(0.01＜P＜0.05)，其它監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)變化不顯著(P＞0.05)。模型組剩余肝組織術(shù)后1d有廣泛的肝細(xì)胞變性和輕度萎縮，偶見(jiàn)竇狀隙淤血，肝小葉內(nèi)有局部肝細(xì)胞壞死灶或片狀壞死，間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤(rùn);術(shù)后7d可見(jiàn)局

9、部肝小葉內(nèi)壞死區(qū)域有肝細(xì)胞的增殖，局部匯管區(qū)纖維性結(jié)締組織增生等。與對(duì)照組相比，在術(shù)后即刻丙二醛升高差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)中1h和術(shù)后1d肝組織丙二醛變化差異顯著(0.01＜P＜0.05)，其他監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)變化不顯著(P＞0.05);在術(shù)后即刻超氧化物歧化酶變化差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)后1d變化差異顯著(0.01＜P＜0.05)，其他監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)變化不顯著(P＞0.05);在術(shù)后即刻過(guò)氧化氫酶變化差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)

10、中1h術(shù)后1d差異顯著(0.01＜P＜0.05)，其他監(jiān)測(cè)時(shí)間點(diǎn)變化不顯著(P＞0.05)。在術(shù)后1d肝組織中Caspase-3活性相對(duì)于對(duì)照組變化差異極顯著(P＜0.01)，術(shù)中即刻和術(shù)后3d變化差異顯著(0.01＜P＜0.05)，其他時(shí)間點(diǎn)變化不顯著(P＞0.05)。
　　通過(guò)試驗(yàn)結(jié)果，得出以下結(jié)論:
　　(1)運(yùn)用腹腔鏡微創(chuàng)外科技術(shù)成功建立了小型豬肝臟大部分切除模型和小型豬肝臟缺血合并部分切除模型。
　　(2)通

11、過(guò)對(duì)小型豬圍手術(shù)期生命體征、循環(huán)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、肝腎功能、凝血功能等綜合監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)，各項(xiàng)生理指標(biāo)均維持在安全范圍之內(nèi)，證明了該技術(shù)和操作方法是安全、可行的。
　　(3)與傳統(tǒng)開(kāi)腹手術(shù)建立小型豬肝臟損傷模型相比，腹腔鏡手術(shù)切口小、出血量少、術(shù)后粘連輕，且具有對(duì)動(dòng)物機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)小、術(shù)后恢復(fù)較快等微創(chuàng)優(yōu)勢(shì)。
　　(4)在模型建立后，通過(guò)對(duì)小型豬肝臟組織及血清的檢測(cè)與評(píng)估，明確了損傷后肝臟功能、病理學(xué)以及肝臟細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子與生長(zhǎng)