多效蛋白PTN在肺腺癌血清、組織和細胞中的表達及意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,其死亡率在我國居各種惡性腫瘤之首。肺癌對人類健康的危害日益嚴重,直接影響人類的身心健康和生活質量,肺癌死亡率高的主要原因是由于難以早期發(fā)現(xiàn)和易于侵襲轉移,導致患者手術后五年存活率降低。近年來,許多學者把研究的焦點聚集在肺癌的早期診斷和EMT(上皮間質轉化)上。
   PTN(pleiotrophin)最早是在1989年華盛頓大學醫(yī)學中心純化的一種生長因子,當時認為該因子為17KD的蛋白,與肝素具有

2、高親和性,并首次被命名為HBGF-8(heparin binding growth factor-8)。1990年華盛頓大學的醫(yī)學中心的進一步研究發(fā)現(xiàn),該因子與當時已知的7個肝素結合生長因子不存在明顯的同源性,并因該蛋白具有多種生物學活性而改名為PTN(pleiotrophin),意為多效蛋白,而更能準確地表達該因子的特性。PTN編碼168個氨基酸,與MK存在50%的序列同源性,兩者共同組成肝素結合超家族。PTN在多種腫瘤組織及血清中高

3、表達,具有促有絲分裂及促進血管新生的特性,影響腫瘤細胞的血供、生長及轉移。研究表明,PTN蛋白在肺癌組織中含量豐富,早期即可在血漿中出現(xiàn),并且與腫瘤的分期相關,2002年Jajer等用ELASA法檢測肺癌患者血清中的PTN表達水平,發(fā)現(xiàn)PTN濃度比正常血清中的濃度顯著增高,并且與臨床病理分期成正相關,與化療藥物成負相關。
   目的:
   檢測肺腺癌患者術前血清標本及相對應的術后切除肺腺癌組織標本,同時檢測肺腺癌患者胸

4、水標本中的PTN蛋白的表達,探討PTN蛋白在肺腺癌患者三種不同標本中的表達及意義。
   材料與方法:
   一、標本收集
   收集2008年-2010年之間肺腺癌患者的術前血清50例和相對應的肺腺癌患者的術后切除組織標本,50例肺腺癌患者所致的惡性胸水。其中有3例患者既有術前血清,術后組織標本,又有相對應的胸水標本。另收取20例正常獻血者血清、20例癌旁組織、20例胸水良性增生細胞作為對照。所有標本均取自于中

5、國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院病理科。
   二、免疫組織化學染色
   鼠抗人PTN(H-6)(sc-74443)單克隆抗體購自美國Snata公司,兔抗人TTF1單克隆抗體、鼠抗人CK19單克隆抗體、鼠抗人E-ca單克隆抗體、兔抗人vimentin單克隆抗體、S-P超敏免疫組化試劑盒和DAB酶底物顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術有限公司。染色方法根據(jù)試劑盒說明進行。
   三、Western Blot蛋白印跡
 

6、  將含80μg總蛋白的血清和胸水細胞裂解產物進行10%SDS-PAGE電泳1.5h后,轉印至PVDF膜(50V,2h),脫脂奶粉室溫封閉2h,經TTBS沖洗3次,抗PTN單克隆抗體(1:100)4℃孵育過夜后,辣根過氧化物酶標記二抗37℃孵育2h,TTBS洗三次后ECL發(fā)光。以β-actin為內對照,比較各條帶灰度值。
   四、統(tǒng)計分析
   應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理,采用X2檢驗(不滿條件時用Fi

7、sher確切概率法)分析各組計數(shù)資料,P<0.05為差異有:計學意義。
   結果:
   1、PTN在正常獻血者血清中未見特異性條帶,在肺腺癌患者的血清中可見有特異性條帶,其中Ⅳ期肺腺癌患者的血清PTN蛋白表達水平明顯高于Ⅰ期肺腺癌患者的血清PTN蛋白表達水平。
   2、PTN在肺腺癌組織中的陽性率40%(20/50)高于癌旁正常組織中的陽性率0%(0/20),其中在肺腺癌組織中PTN蛋白的表達與年齡、性別、

8、分化程度無關,與臨床分期和淋巴結有無轉移有關,差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
   3、PTN蛋白在惡性胸水腺癌細胞中的陽性率62%(31/50)高于胸水良性增生細胞中的陽性率0%(0/20),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
   4、PTN蛋白在惡性胸水腺癌細胞中可見有特異性條帶,在胸水良性增生細胞中未見特異性條帶。
   5、PTN蛋白在肺腺癌患者胸水細胞中的陽性率62%(31/50)高于組織中

9、的陽性率40%(20/50)、組織中的陽性率40%(20/50)高于肺腺癌患者血清中的陽性率18%(9/50),差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。并且,在3例分別來源于同一例患者的這三種標本中,PTN和Vimentin在血清和肺腺癌組織中陰性表達,E-ca陽性表達;但在相對應的惡性胸水腺癌細胞中PTN和Vimentin呈陽性表達,E-ca陰性表達。
   結論:
   1、PTN在肺腺癌患者的血清中可見有特異性條帶,

10、并且Ⅳ期表達水平明顯高于Ⅰ期表達水平,提示Western-blot方法可以檢測出PTN蛋白的表達,并能初步預測臨床分期。
   2、PTN在肺癌組織中高表達,且其表達與臨床分期和淋巴結轉移密切相關,提示其表達在肺癌的侵襲轉移過程中起到促進作用。
   3、PTN在胸水細胞中的陽性率高于組織和血清中的陽性率,并且在來源于同一例患者的三種標本中,PTN在血清和組織中陰性表達,在胸水細胞中陽性表達,進一步提示其表達在肺癌的侵襲

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