多效蛋白PTN在肺腺癌血清、組織和細(xì)胞中的表達(dá)及意義.pdf

1、肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在我國居各種惡性腫瘤之首。肺癌對人類健康的危害日益嚴(yán)重，直接影響人類的身心健康和生活質(zhì)量，肺癌死亡率高的主要原因是由于難以早期發(fā)現(xiàn)和易于侵襲轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致患者手術(shù)后五年存活率降低。近年來，許多學(xué)者把研究的焦點聚集在肺癌的早期診斷和EMT（上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化）上。
　　 PTN(pleiotrophin)最早是在1989年華盛頓大學(xué)醫(yī)學(xué)中心純化的一種生長因子，當(dāng)時認(rèn)為該因子為17KD的蛋白，與肝素具有

2、高親和性，并首次被命名為HBGF-8(heparin binding growth factor-8)。1990年華盛頓大學(xué)的醫(yī)學(xué)中心的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該因子與當(dāng)時已知的7個肝素結(jié)合生長因子不存在明顯的同源性，并因該蛋白具有多種生物學(xué)活性而改名為PTN(pleiotrophin)，意為多效蛋白，而更能準(zhǔn)確地表達(dá)該因子的特性。PTN編碼168個氨基酸，與MK存在50％的序列同源性，兩者共同組成肝素結(jié)合超家族。PTN在多種腫瘤組織及血清中高

3、表達(dá)，具有促有絲分裂及促進(jìn)血管新生的特性，影響腫瘤細(xì)胞的血供、生長及轉(zhuǎn)移。研究表明，PTN蛋白在肺癌組織中含量豐富，早期即可在血漿中出現(xiàn)，并且與腫瘤的分期相關(guān)，2002年Jajer等用ELASA法檢測肺癌患者血清中的PTN表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)PTN濃度比正常血清中的濃度顯著增高，并且與臨床病理分期成正相關(guān)，與化療藥物成負(fù)相關(guān)。
　　 目的:
　　 檢測肺腺癌患者術(shù)前血清標(biāo)本及相對應(yīng)的術(shù)后切除肺腺癌組織標(biāo)本，同時檢測肺腺癌患者胸

4、水標(biāo)本中的PTN蛋白的表達(dá)，探討PTN蛋白在肺腺癌患者三種不同標(biāo)本中的表達(dá)及意義。
　　 材料與方法:
　　 一、標(biāo)本收集
　　 收集2008年-2010年之間肺腺癌患者的術(shù)前血清50例和相對應(yīng)的肺腺癌患者的術(shù)后切除組織標(biāo)本，50例肺腺癌患者所致的惡性胸水。其中有3例患者既有術(shù)前血清，術(shù)后組織標(biāo)本，又有相對應(yīng)的胸水標(biāo)本。另收取20例正常獻(xiàn)血者血清、20例癌旁組織、20例胸水良性增生細(xì)胞作為對照。所有標(biāo)本均取自于中

5、國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科。
　　 二、免疫組織化學(xué)染色
　　 鼠抗人PTN(H-6)(sc-74443)單克隆抗體購自美國Snata公司，兔抗人TTF1單克隆抗體、鼠抗人CK19單克隆抗體、鼠抗人E-ca單克隆抗體、兔抗人vimentin單克隆抗體、S-P超敏免疫組化試劑盒和DAB酶底物顯色試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。染色方法根據(jù)試劑盒說明進(jìn)行。
　　 三、Western Blot蛋白印跡
　

6、　 將含80μg總蛋白的血清和胸水細(xì)胞裂解產(chǎn)物進(jìn)行10％SDS-PAGE電泳1.5h后，轉(zhuǎn)印至PVDF膜(50V，2h)，脫脂奶粉室溫封閉2h，經(jīng)TTBS沖洗3次，抗PTN單克隆抗體(1：100)4℃孵育過夜后，辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗37℃孵育2h，TTBS洗三次后ECL發(fā)光。以β-actin為內(nèi)對照，比較各條帶灰度值。
　　 四、統(tǒng)計分析
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用X2檢驗（不滿條件時用Fi

7、sher確切概率法）分析各組計數(shù)資料，P＜0.05為差異有:計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、PTN在正常獻(xiàn)血者血清中未見特異性條帶，在肺腺癌患者的血清中可見有特異性條帶，其中Ⅳ期肺腺癌患者的血清PTN蛋白表達(dá)水平明顯高于Ⅰ期肺腺癌患者的血清PTN蛋白表達(dá)水平。
　　 2、PTN在肺腺癌組織中的陽性率40％(20/50)高于癌旁正常組織中的陽性率0％(0/20)，其中在肺腺癌組織中PTN蛋白的表達(dá)與年齡、性別、

8、分化程度無關(guān)，與臨床分期和淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、PTN蛋白在惡性胸水腺癌細(xì)胞中的陽性率62％(31/50)高于胸水良性增生細(xì)胞中的陽性率0％(0/20)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4、PTN蛋白在惡性胸水腺癌細(xì)胞中可見有特異性條帶，在胸水良性增生細(xì)胞中未見特異性條帶。
　　 5、PTN蛋白在肺腺癌患者胸水細(xì)胞中的陽性率62％(31/50)高于組織中

9、的陽性率40％(20/50)、組織中的陽性率40％(20/50)高于肺腺癌患者血清中的陽性率18％(9/50)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。并且，在3例分別來源于同一例患者的這三種標(biāo)本中，PTN和Vimentin在血清和肺腺癌組織中陰性表達(dá)，E-ca陽性表達(dá)；但在相對應(yīng)的惡性胸水腺癌細(xì)胞中PTN和Vimentin呈陽性表達(dá)，E-ca陰性表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 1、PTN在肺腺癌患者的血清中可見有特異性條帶，

10、并且Ⅳ期表達(dá)水平明顯高于Ⅰ期表達(dá)水平，提示W(wǎng)estern-blot方法可以檢測出PTN蛋白的表達(dá)，并能初步預(yù)測臨床分期。
　　 2、PTN在肺癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)與臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示其表達(dá)在肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中起到促進(jìn)作用。
　　 3、PTN在胸水細(xì)胞中的陽性率高于組織和血清中的陽性率，并且在來源于同一例患者的三種標(biāo)本中，PTN在血清和組織中陰性表達(dá)，在胸水細(xì)胞中陽性表達(dá)，進(jìn)一步提示其表達(dá)在肺癌的侵襲