局部定向抗結(jié)核藥物緩釋材料在兔體內(nèi)的評價(jià)研究.pdf

1、結(jié)核病長期以來嚴(yán)重影響著人們的健康和生活質(zhì)量，其中骨關(guān)節(jié)結(jié)核是除周圍淋巴結(jié)核之外，最常見的肺外結(jié)核，約占全部結(jié)核病的3％左右。由于骨關(guān)節(jié)結(jié)核的病灶的特殊性，傳統(tǒng)的口服抗結(jié)核藥物難以在病灶區(qū)域達(dá)到理想的藥物濃度，反而會導(dǎo)致一系列的副作用。為了解決這一問題，局部緩釋藥物治療骨結(jié)核的方法走入人們的視線中。目前，對于脊柱結(jié)核病灶清除后形成的骨缺損多采用自體骨、同種異體骨及人工骨作為修復(fù)材料。其中，自體骨及同種異體骨無法加入大量的抗結(jié)核藥物，所以

2、人工骨成為人們常用的局部藥物緩釋的載體。聚乳酸-羥基乙酸聚合物（PLGA）具有載藥量較大、釋藥時(shí)間長及降解時(shí)間可調(diào)等優(yōu)點(diǎn)，β-磷酸三鈣(β-TCP)擁有良好地生物相容性，降解也很完全，降解的同時(shí)可以為新骨的形成提供鈣、磷等元素，促進(jìn)新骨的形成。異煙肼（INH）和利福平（RFP）是目前臨床上常用的兩種一線抗結(jié)核藥。本實(shí)驗(yàn)將INH和RFP加入到聚乳酸-羥基乙酸聚合物-β-磷酸三鈣材料（PLGA-β-TCP）中，觀察其在修復(fù)兔橈骨缺損中的作用

3、。
　　1、合成INH-RFP-PLGA-β-TCP載藥緩釋材料
　　我們將PLGA溶解到適量的1,4-二氧硫環(huán)之中，配成適度的溶液，將PLGA充分溶解的溶液平均分為4組，根據(jù)PLGA的含量稱取相應(yīng)的β-TCP粉末。根據(jù)預(yù)定的載藥量稱取INH及RFP粉末，4組溶液中分別加入β-TCP粉末、β-TCP及INH粉末、β-TCP及RFP粉末以及β-TCP、INH及RFP粉末,超聲混勻，將混懸液置入模具中。依次在-4℃、-20℃及-

4、80℃逐漸冷凍2小時(shí)。將模具置入凍干機(jī)中冷凍干燥72小時(shí)。所得材料冷凍保存待用。
　　2、制備兔的橈骨遠(yuǎn)端骨缺損及兔體內(nèi)成骨能力觀察
　　將50只2.0~2.5kg的雌雄不限的新西蘭大白兔隨機(jī)分為5組，每組10只，各組分別使用手術(shù)的方法制作一長約10mm的橈骨缺失，在2、3、4及5組的橈骨缺損處分別植入PLGA-β-TCP、INH-PLGA-β-TCP、RFP-PLGA-β-TCP及INH-RFP-PLGA-β-TCP，第1

5、組為空白對照組，不植入任何材料的空白對照組。12周后，通過大體觀察、影像學(xué)檢查、組織學(xué)觀察、生物力學(xué)檢查以及骨形態(tài)計(jì)量學(xué)等手段對該材料在兔體內(nèi)的成骨情況進(jìn)行評定以及使用高效液相色譜法測定局部抗結(jié)核藥物的釋放情況。
　　結(jié)果表明：12周后，通過影像學(xué)Lane-Sandhu X線評分發(fā)現(xiàn)空白對照組未達(dá)到骨愈合的標(biāo)準(zhǔn)，而2、3、4及5組均達(dá)到骨愈合的標(biāo)準(zhǔn)；組織學(xué)觀察第2、3、4及5組可見骨組織已完全愈合，空白對照組可見大量的纖維細(xì)胞及脂

6、肪細(xì)胞；生物力學(xué)檢查空白對照組形成骨不連，第2、3、4及5組以α=0.05的標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)值為1.11小于3.24，P值為0.37大于0.05說明各實(shí)驗(yàn)組之間無顯著差異；骨形態(tài)計(jì)量學(xué)以α=0.05的標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)值為431.10大于3.24，P值小于0.05說明各組之間不完全相同，通過后續(xù)的兩兩比較表明，對照組與各實(shí)驗(yàn)組之間均有顯著差異，第2組與3、4及5組之間無顯著差異。術(shù)后第4周、8周及12周，通過高效液相色譜的方法對第3、4及5組的外周血藥物

7、濃度進(jìn)行測定，結(jié)果顯示術(shù)后4周，第3組局部INH的濃度為15.49±1.45μg·ml-1,第4組局部RFP的濃度為16.23±1.51μg·ml-1，第5組局部 INH及 RFP的濃度分別為15.54±1.47μg·ml-1和16.31±1.35μg·ml-1，術(shù)后8周，第3組局部INH的濃度為5.49±0.52μg·ml-1,第4組局部 RFP的濃度為6.48±0.58μg·ml-1，第5組局部 INH及 RFP的濃度分別為5.54

8、±0.41μg·ml-1和6.26±0.46μg·ml-1，術(shù)后12周，第3組局部INH的濃度為1.93±0.21μg·ml-1,第4組局部 RFP的濃度為1.97±0.21μg·ml-1，第5組局部 INH及 RFP的濃度分別為1.56±0.19μg·ml-1和2.26±0.23μg·ml-1，12周后，通過高效液相色譜的方法對第3、4及5組的局部藥物濃度進(jìn)行測定，結(jié)果顯示第3組局部 INH的濃度為6.49±0.38μg·ml-1,第