牛蒡茶的毒理學(xué)評(píng)價(jià)及輔助降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 本研究通過(guò)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)和輔助降血脂實(shí)驗(yàn)，探討牛蒡茶的安全性和降血脂作用，為拓展牛蒡在功能性食品、保健品、藥品等相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 (1)小鼠急性毒性試驗(yàn)選擇20只小鼠，雌雄各半，體重18.2～21.6g，每只小鼠按0.2ml/10g.bw，每天灌胃2次，給予劑量為20.0g/kg.bw，染毒2周后，觀察小鼠的中毒癥狀，記錄小鼠死亡數(shù)量。

2、>　　 (2)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)
　　 ①沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）依據(jù)毒性試驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)設(shè)立8組:五個(gè)劑量組（8、40、200、1000、5000μg/皿），自發(fā)回變組、溶劑對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。在加S-9與不加S-9混合液的條件下，應(yīng)用平板摻入法進(jìn)行試驗(yàn)。大鼠肝勻漿制備的S-9混合液經(jīng)多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)后作為本實(shí)驗(yàn)的體外活化系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的菌株為鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102，經(jīng)鑒定后符合

3、要求。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別設(shè)立3個(gè)平皿。判斷陽(yáng)性結(jié)果的要求為受試物的回變菌落數(shù)是自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍以上，并且存在劑量—反應(yīng)關(guān)系。相同條件下，重復(fù)本實(shí)驗(yàn)兩次。
　　 ②小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)50只小鼠，雌雄各半，按體重(25～30g)大小隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為蒸餾水陰性對(duì)照組、環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40mg/kg.bw)、低劑量組（2.5g/kg.bw）、中劑量組（5g/kg.bw）、高劑量組(10.0g/kg.bw)。

4、灌胃量按0.2ml/10g.bw，兩次染毒時(shí)間相隔24h。第二次染毒后，6h后麻醉處死小鼠剝?nèi)」晒?，制作玻片，鏡下觀察每只小鼠1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞(PCE)，計(jì)數(shù)微核細(xì)胞數(shù)，通過(guò)微核細(xì)胞數(shù)/嗜多染紅細(xì)胞數(shù)得出微核率，以千分率表示。與此同時(shí)，鏡下觀察200個(gè)PCE，計(jì)數(shù)正染紅細(xì)胞(NCE)數(shù)量，計(jì)算二者比值(PCE/NCE)。
　　 ③小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)雄性小鼠25只，體重25～30g，按照體重大小隨機(jī)分成5組，每組5只。實(shí)驗(yàn)方法

5、同上②。組別分別為蒸餾水陰性對(duì)照組、環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組(40mg/kg.bw)、低劑量組(2.5 g/kg.bw)、中劑量組(5g/kg.bw)、高劑量組(10.0g/kg.bw)。灌胃1次/d，持續(xù)5d，35d后麻醉脫臼處死小鼠，剝離雙側(cè)附睪，制作玻片鏡檢。計(jì)數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子的畸變類型和數(shù)量，以百分率表示精子畸形率。
　　 (3)大鼠30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)選擇體重74～94g斷乳大鼠80只，雌雄各半，按照體重大小隨機(jī)分為4組

6、。陰性對(duì)照組和3個(gè)劑量組。劑量組相當(dāng)于人體推薦量的25、50、100倍，分別為3.75、7.50、15.00g/kg.bw。陰性對(duì)照組，灌胃等體積蒸餾水。單籠喂養(yǎng)，自由飲食，30d后，禁食不禁水16h，抽取腹動(dòng)脈血，測(cè)定血生化指標(biāo)并檢查內(nèi)臟病理情況。
　　 2、輔助降血脂實(shí)驗(yàn)
　　 雄性斷乳大鼠40只，體重74～94g，根據(jù)血脂水平隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為高脂對(duì)照組、低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組。高脂對(duì)照組飼高脂飼料同時(shí)

7、灌胃蒸餾水;低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組飼高脂飼料同時(shí)灌胃不同劑量的受試物。連續(xù)觀察31天后，取尾血測(cè)定各項(xiàng)血脂指標(biāo)。
　　 結(jié)果:
　　 1、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)
　　 (1)急性毒性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)期間，小鼠未出現(xiàn)中毒癥狀及死亡情況，同時(shí)受試樣品對(duì)雄性及雌性小鼠的MTD均高于20.0g/kg·bw。依據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，表明樣品的急性毒性級(jí)別為無(wú)毒級(jí)。
　　 (2)遺傳毒性實(shí)驗(yàn)
　　 ①Ames試驗(yàn)兩次實(shí)驗(yàn)觀察到各劑量

8、組回變菌落數(shù)均未達(dá)到自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，不存在劑量—反應(yīng)關(guān)系，結(jié)果為陰性。在添加和不添加S-9的條件下，未導(dǎo)致四株實(shí)驗(yàn)鼠傷寒沙門氏菌TA97、TA98、TA100、TA102菌株出現(xiàn)遺傳毒性。②小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實(shí)驗(yàn)與陰性對(duì)照組比較，各劑量組微核率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，表明該樣品對(duì)小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核沒(méi)有致突變作用。
　　 ③小鼠精子畸形實(shí)驗(yàn)與陰性對(duì)照組比較，

9、各劑量組小鼠精子畸形率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。表明受試物對(duì)小鼠精子沒(méi)有致畸作用。
　　 (3)大鼠30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，通過(guò)觀察各組小鼠生長(zhǎng)情況良好，體重增量、食物利用率、血常規(guī)及血生化各指標(biāo)、臟器重量和臟器系數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)與對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)且均在正常值范圍。各實(shí)驗(yàn)組沒(méi)有出現(xiàn)中毒體征及死亡情況。
　　 2、輔助降血脂實(shí)驗(yàn)
　　 實(shí)

10、驗(yàn)期內(nèi)，各組動(dòng)物生長(zhǎng)活動(dòng)正常，體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。與高脂對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)低、中、高劑量組大鼠總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)均低于高脂對(duì)照組（P＜0.05或P＜0.01）;高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)均高于高脂模型（P＜0.05），血清TC分別下降0.32％、15.3％、21.4％，血清TG分別下降5.9％、22.6％、32.4％，血清HDL-C分別上升0.02mmol/L、0.24 mmol/L、0.32mmo

11、l/L。
　　 結(jié)論:
　　 1、在急性毒性實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，未見(jiàn)小鼠出現(xiàn)中毒癥狀及死亡情況，同時(shí)牛蒡茶樣品對(duì)雄性及雌性小鼠的MTD均高于20.0g/kg·bw。依據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，表明樣品的急性毒性級(jí)別為無(wú)毒級(jí)。
　　 2、通過(guò)Ames試驗(yàn)，微核試驗(yàn)和精子畸形試驗(yàn)三次遺傳毒性試驗(yàn)，結(jié)果均為陰性，提示牛蒡茶在試驗(yàn)條件下未顯示有遺傳毒性。
　　 3、30d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果，牛蒡茶對(duì)大鼠各觀察指標(biāo)未產(chǎn)生明顯的毒性作用