60Co-γ照射雄性小鼠建立無精子癥動物模型.pdf

1、研究背景及目的：無精子癥發(fā)病原因繁多，且其機(jī)制復(fù)雜，動物試驗(yàn)是常用的研究手段，尤其近年來干細(xì)胞移植的研究愈來愈廣泛，建立適宜的雄性不育無精子癥動物模型，將為雄性不育的的研究創(chuàng)造有利的條件。目前常用的動物模型建立方法有：喂飼腺嘌呤、實(shí)驗(yàn)性精索靜脈曲張、環(huán)磷酰胺喂飼或腹腔注射等，但多由于誘導(dǎo)追蹤時間短(多不足實(shí)驗(yàn)動物的一個生精周期)，缺乏穩(wěn)定性，在此平臺上進(jìn)行雄性不育的治療性實(shí)驗(yàn)，其可信度值得商榷。此外，造模過程中的有創(chuàng)性操作及并發(fā)的機(jī)體其

2、他系統(tǒng)的損傷導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動物的死亡率較高，增加了有限的實(shí)驗(yàn)成本。性腺組織對放射線比較敏感，尤其以精原細(xì)胞和處于分裂狀態(tài)的精母細(xì)胞更敏感。作為射線的一種，60Co-γ臨床上多用做腫瘤的放射治療，然而60Co-γ可直接引起性腺的生精功能損傷甚至喪失。同時，60Co-γ全身照射亦可引起下丘腦、垂體的損傷，引起機(jī)體內(nèi)分泌水平的變化。本試驗(yàn)采用60Co-γ對雄性小鼠生殖系統(tǒng)的影響而達(dá)到無精子癥，探討其作用的合適劑量、方法及可能機(jī)制，為雄性不育的實(shí)驗(yàn)研

3、究提供合適的動物模型的建立方法。
　　 方法：100只昆明小鼠隨機(jī)分為A組(n=10)、B組(n=15)、C組(n=15)、D組(n=15)、E組(n=15)、F組(n=15)和G組(n=15)，A組為空白對照，B組腹腔注射環(huán)磷酰胺75mg/(kg·d)，連續(xù)5d，實(shí)驗(yàn)C～G組分別給予60Co-γ5 Gy、6 Gy、7 Gy、8 Gy、6 Gy全身均勻照射1次，G組在照射7d后再次給予60Co-γ4Gy全身均勻照射1次，觀察35

4、d；記錄小鼠每天的一般狀況、體征及體重變化，做受孕試驗(yàn)，三個月后，測量小鼠體重和雙側(cè)睪丸重量，并計算睪丸指數(shù)；酶聯(lián)免疫法測定血清FSH、LH、T和E2水平，計算T/E2比值；觀察睪丸組織的HE染色病理情況，免疫組化SABC法檢測精原細(xì)胞表面標(biāo)記c-kit表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：小鼠照射后，前4h精神緊張、多動、不喜食，隨后精神漸萎靡，皮毛無光澤、脫落，惡冷蜷縮；自照射后3d，小鼠開始出現(xiàn)死亡，約10～12d一般情況逐漸恢復(fù)，各組