大鼠食管下端肌間神經分布及苯扎氯銨毀損效果研究.pdf

1、目的：食管下端肌間神經發(fā)育異?；驌p傷可導致食管下端運動性疾患，如胃食管返流、賁門失弛緩癥等，臨床上需要有合適的動物模型來研究這些疾病。本研究通過正常SD大鼠食管下端肌間神經發(fā)育解剖學觀察，及應用不同濃度BAC毀損大鼠食管下端肌間神經研究，試圖為今后提供不同的食管肌間神經毀損模型，并為進一步開展與小兒LES肌間神經異常性疾病有關的的實驗研究奠定基礎。 方法： 1.取出生后14天(P14組)和成年大鼠(Adult組)SD大鼠

2、的LES及EB標本，固定后石蠟包埋。 2.蛋白基因產物9.5(P6P9.5)免疫組化結合圖像分析評價LES肌間神經發(fā)育情況。 3.nNOS和AchE免疫組化結合圖像分析評價LES氮能及膽堿能肌間神經發(fā)育情況。 4.建立五種不同濃度BAC溶液食管下端肌間神經毀損動物模型：清潔級SD大鼠(200-250g)，按BAC濃度隨機分組為：0.025％組、0.05％組、0.1％組、0.2％組、0.4％組及生理鹽水組(對照組)

3、，每組40只。 5.食管下端肌間神經鋪片研究，并進行NADPH-d酶的組織化學染色，三維觀察肌間神經的毀損與恢復情況。 6.PGP9.5、nNOS和AchE免疫組化定性和定量分析各組BAC處理段神經元毀損情況。 結果： 1.成年鼠與P14幼年鼠(11.8±5.8個/橫切面)相比，LES的神經元密度(6.6±4.1個/橫切面)逐漸下降(P＜0.01)，神經元胞體增大(110.47±69.96μm2)、胞漿著

4、色加深。但食管體部神經元的密度兩者之間無明顯分別。 2.成年鼠LES神經元的胞體最長徑(Dmax)(20.41±7.56gm)、胞核最長徑(Nmax)(7.36±1.27μm)與陽性神經元胞體面(Area)(110.47±69.96μm2)較幼年鼠增大；成年鼠的積分光密度(IOD)(36.80±19.47)及平均光密度(OD)(0.348±0.060)較幼年鼠增加。 3.鋪片研究顯示BAC處理后第2周，部分細胞失去自然的

5、形態(tài)，邊緣變得參差不齊，胞漿染色變淡，其他濃度組亦出現(xiàn)相似情況；第4周神經叢內神經元數(shù)量明顯減少，神經纖維網(wǎng)絡稀疏，部分神經纖維交叉處神經元消失，僅剩神經網(wǎng)絡。第8周神經元大部分消失，神經叢分布稀疏，神經叢內神經元減少，剩余神經元胞漿染色均勻，外型自然，胞核清晰。 4.PGP9.5、nNOS、AchE免疫組化顯示，BAC處理后部分神經元胞漿出現(xiàn)空泡化；部分神經元胞核出現(xiàn)固縮，胞漿內出現(xiàn)團塊樣結構，胞漿內結構變得疏松，胞核、胞漿分

6、辨不清；BAC處理4周后，食管下端縱、環(huán)肌之間神經元消失，僅剩部分神經元碎片。 5.所有濃度BAC處理8周，實驗大鼠肌間神經元個數(shù)與BAC濃度之間的關系研究發(fā)現(xiàn)，毀損后大鼠肌間神經元密度與BAC濃度呈負相關，其直線回歸方程Y=4.55-11.87X，回歸系數(shù)為-11.87，結果有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。即BAC濃度越高肌間神經元毀損程度越重。 6.0.2％、0.4％組術后第2周密度1.50±1.06個/橫切面、1.2

7、5±0.71個/橫切面較同期對照組5.38±2.33個/橫切面開始減少。第4、8周所有濃度組均開始減少。 結論： 1.PGP9.5、riNOS、AchE特異性及敏感性高，能夠標記大鼠不同生長時期的食管肌間神經元和BAC處理前后的神經元。 2.生后SD大鼠食管下端肌間神經元有一個自我成熟的過程，隨著日齡增長SD大鼠食管下端肌間神經元呈逐漸減少的趨勢，神經元的胞體、胞核增大，胞漿染色加深； 3.BAC溶液能夠