人食管下括約肌的套索纖維和鉤狀纖維與食管環(huán)形肌、胃底環(huán)形肌的G蛋白表達規(guī)律.pdf

1、目的:人食管下括約肌(LES)是位于食管胃連接部特殊增厚的環(huán)形肌,其寬度約2-3cm。Liebermann-Meffert等首次提出人LES由位于胃小彎側呈半環(huán)形的鉤狀纖維(clasp fibres)和位于大彎側呈斜行分布的套索纖維(slingfibres)共同構成,這兩束肌纖維與膈腳一起在食管胃結合部形成高壓帶,維持LES的關閉狀態(tài),使LES形成一種類似單向閥門的結構。正常狀態(tài)下,由于LES的持續(xù)性收縮使胃內容物不能反流入食管,另一方

2、面,由于LES的適時舒張允許了食物繼續(xù)下行入胃,或嘔吐和打嗝,使胃內的液體或氣體反流如食管并經口腔排出。LES的收縮和舒張功能調節(jié)機制非常復雜,包括了神經系統(tǒng)、體液因素及自身肌源性等多種因素。G蛋白是細胞跨膜信號轉導系統(tǒng)的重要組成部分,絕大多數肽類激素都是通過G蛋白傳導通路發(fā)揮作用的。在神經遞質物質中,除了幾種氨基酸遞質外,其余的神經遞質物質,都主要是以在突觸后細胞中產生第二信使類物質來完成跨膜信號轉導的。有些被激活的G蛋白也可以直接調

3、控一些通道的功能狀態(tài),改變膜的反應。不同的外界信號通過膜受體在膜內生成第二信使來進行跨膜信號轉導的,都需要通過結構類似的各種G蛋白的介導。胃動素和胃泌素激活大鼠胃竇平滑肌細胞膜的Gi-3蛋白,繼而引起平滑肌細胞的收縮。促胰液素引起的大鼠胃平滑肌細胞的舒張由Gs蛋白介導。但目前國內外對人LES受體類型及其分型以及調節(jié)機制的研究,主要局限于膽堿能受體,對于G蛋白的研究則相對甚少?，F有的對人食管下括約肌(LES)的研究也主要是針對動物(大鼠等

4、),與人有著種屬,生理學的差異,對于人LES的G蛋白的表達規(guī)律及調節(jié)機制的相關研究則未見報告。本實驗采用蛋白印跡法(Western-blot)研究人LES的G蛋白的Gi-3、Go、Gq11、Gs亞型在套索纖維、鉤狀纖維、食管環(huán)行肌和胃底環(huán)行肌中的表達規(guī)律,為進一步研究人LES調節(jié)機制奠定基礎,為食管運動功能障礙性疾病的臨床治療提供理論依據。
　　 方法:
　　 1選取2008年12月到2009年10月在我院因高位食管中段

5、癌行食管大部切除術患者30例。手術室采集新鮮食管胃連接部手術標本,銳性剝去胃賁門部及食管下段的粘膜層及粘膜下層后,制備套索纖維(S)、鉤狀纖維(C)、食管體部環(huán)行肌(E)和胃底環(huán)行肌(G)的肌條;
　　 2按照100μl TBS/10mg標本的比例加入TBS,4℃條件下用組織勻漿器加入TBS液勻漿,勻漿液(4℃,1000×g)離心10分鐘。棄上清后,以美國PIERCE公司的膜蛋白提取試劑盒制備膜受體蛋白,BCA法定量,調整蛋白至

6、相同濃度后,應用電泳儀電泳,分離出與4種G蛋白亞型的分子量大小相應的蛋白后轉膜,最后應用G蛋白亞型抗體行Western blot檢測蛋白的表達,并分析IOD值。
　　 結果:
　　 Western blot四種G蛋白亞型有其相應蛋白條帶的表達,分別是Gq/11、Gi-3、Go、Gs,分子量分別為41kDa、45kDa、40kDa、48kDa。相同肌條不同亞型蛋白表達的IOD值在clasp fibers(C)中兩兩比較,G

7、i-3較Go、Gq11、Gs的表達少。相同亞型在各肌條間沒有蛋白表達的差異。
　　 結論:
　　 1.四種G蛋白亞型在鉤狀纖維(C)、套索纖維(S)、食管環(huán)形肌(E)、胃底環(huán)形肌(G)的肌條中均有表達。
　　 2.每一種肌束中的四種亞型的表達水平有差異。在鉤狀纖維(C)中Gi-3較Go、Gq11、Gs的表達少。在套索纖維(S)、食管環(huán)形肌(E)、胃底環(huán)形肌(G)中四種亞型的表達量無統(tǒng)計學差異。
　　 3.