苯扎氯銨致結(jié)膜下組織纖維化機(jī)制的研究.pdf

1、目的:苯扎氯銨（benzalkoniumchloride，BAC）是滴眼液中最常用的防腐劑。大量臨床及實驗研究表明，長期使用含BAC的滴眼液會引起一系列的眼表不良反應(yīng)。本研究主要探討B(tài)AC致結(jié)膜下組織纖維化的機(jī)制。
　　方法:SD雄性大鼠45只，隨機(jī)分成對照組、實驗組和細(xì)胞培養(yǎng)組，每組15只。對照組和實驗組分別用PBS和0.01％BAC滴左眼，每天兩次，每12小時一次。一個月后，取大鼠左眼球結(jié)膜組織提取蛋白和RNA及制備石蠟包埋切

2、片;細(xì)胞培養(yǎng)組取大鼠左眼球結(jié)膜成纖維細(xì)胞(CFs)進(jìn)行原代培養(yǎng)，分別用PBS、0.00005％BAC、0.000075％BAC、0.000075％BAC+LY2157299(TGF-βR1抑制劑，200μM)、0.000075％BAC+NS-398（COX-2抑制劑，100μM）作用于細(xì)胞，24小時后提取蛋白和RNA。以WesternBlot(WB)和qRT-PCR方法檢測結(jié)膜組織和原代培養(yǎng)的CFs的細(xì)胞外基質(zhì)（Ⅰ型膠原α1鏈，Col1

3、A1;纖維連接蛋白-1，F(xiàn)N-1），TGF-β信號通路相關(guān)分子(TGF-β1、TGF-βR1、TGF-βR2、Smad2、Smad3、P-Smad3)和COX-2的蛋白及mRNA表達(dá)水平，并以蘇木素-伊紅染色法(H&E)、苦味酸-酸性品紅染色法（VanGieson's）、過碘酸-希夫染色法(PAS)和免疫組織化學(xué)染色法觀察結(jié)膜下組織的病理改變及炎癥細(xì)胞的浸潤情況。
　　結(jié)果:H&E、VanGieson's及PAS染色結(jié)果顯示，0.

4、01％BAC處理組球結(jié)膜上皮細(xì)胞及杯狀細(xì)胞的形態(tài)和數(shù)量與PBS對照組相比無明顯不同，但結(jié)膜下組織成纖維細(xì)胞密度輕微增加，有明顯的膠原纖維沉積;免疫組織化學(xué)染色顯示，0.01％BAC處理組球結(jié)膜下組織未見中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤;WB和qRT-PCR結(jié)果顯示，BAC處理組球結(jié)膜組織和原代培養(yǎng)的CFsCol1A1、FN-1COX-2、TGF-β1、TGF-βR1、Smad3、P-Smad3蛋白或mRNA的表達(dá)均顯著高于PBS對照組，而TGF

5、-βR2和Smad2蛋白的表達(dá)與PBS對照組相比無明顯差異;0.000075％BAC+LY2157299細(xì)胞處理組，P-Smad3、Col1A1和FN-1的蛋白表達(dá)均顯著低于0.000075％BAC處理組;0.000075％BAC+NS-398細(xì)胞處理組，TGF-β1、TGF-βR1、Smad3、P-Smad3蛋白表達(dá)均顯著低于0.000075％BAC處理組。
　　結(jié)論:BAC通過COX-2激活TGF-β1/Smad3信號通路，引