檸檬酸桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶以及qnr和靶位酶改變引起耐藥機制的研究.pdf

1、目的：了解安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床分離的多重耐藥檸檬酸桿菌的耐藥性及其β-內(nèi)酰胺酶基因型分布，探討檸檬酸桿菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機制并指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。 方法：收集2004年1月至2006年9月安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床分離的檸檬酸桿菌52株，采用瓊脂稀釋法測定17種抗菌藥物對52株檸檬酸桿菌的最低抑菌濃度(MIC)，用改良三維試驗檢測52株檸檬酸桿菌ESBLs、AmpC、MBI的產(chǎn)酶情況，再用聚合酶鏈反應(yīng)(P

2、CR)法擴增β-內(nèi)酰胺酶基因，并對擴增產(chǎn)物進(jìn)行基因測序和同源性分析。 結(jié)果：三維試驗檢出31株檸檬酸桿菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶，其中24株菌單純產(chǎn)ESBLs，3株菌單純高產(chǎn)AmpC，2株同時高產(chǎn)AmpC酶和ESBIs,未檢出MBL。31株產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶的檸檬酸桿菌對多種抗生素耐藥。除均對亞胺培南和美羅培南均為100％敏感及對氨芐西林100％耐藥外，β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生株對14種抗生素的耐藥率顯著高于非β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生株。PCR檢出20株菌均

3、攜帶blaTEM樣基因，1株菌攜帶blaSHV樣基因，8株菌攜帶blacTx-M-1樣基因，15株菌攜帶blaCTX-M-13樣基因，5株菌攜帶blaCIT族基因。挑選5株TEM全編碼基因測序均為廣譜酶TEM-1基因；2株CTX-M-1組全編碼基因測序為CTX-M-3亞型；3株CTX-M-13組全編碼基因測序，2株為CTX-M-14亞型(GenBank注冊號：EF416289)，1株為CTX-M-65亞型，均為國內(nèi)外首次報道(GenBa

4、nk注冊號：EF394372)；4株CIT族全編碼基因測序，1株為CMY-2亞型；1株與CMY-2編碼基因序列的同源性為98％，13個堿基突變導(dǎo)致3個氨基酸的改變，是一種新的CMY亞型β-內(nèi)酰胺酶，此序列被命名為CMY-35(GenBank注冊號：EF394371)；2株(22和23號菌株)與CMY-2編碼基因序列的同源性為99％，3個堿基突變導(dǎo)致2個氨基酸的改變，是一種新的CMY亞型β-內(nèi)酰胺酶，此序列被命名為CMY-34(GenBa

5、nk注冊號：EF394370)。 結(jié)論：改良三維試驗可用于檢測同時高產(chǎn)AmpC酶和ESBLs的菌株。我院檸檬酸桿菌β-內(nèi)酰胺酶檢出率高，應(yīng)重視β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生菌的檢測。我院臨床分離的檸檬酸桿菌對β-內(nèi)酰胺類抗生素高度耐藥，對氟喹諾酮類和氨基糖甙類藥物敏感性也較差，對碳青霉烯類抗生素高度敏感。亞胺培南、美羅培南是治療產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶檸檬酸桿菌的最佳藥物。β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生株對抗生素的耐藥率明顯高于非β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生株。檸檬酸桿菌所產(chǎn)β