海洋半乳寡糖芯片制備及寡糖與凝集素相互作用研究.pdf

1、本論文以紅藻來(lái)源的半乳聚糖,κ-,τ-,λ-卡拉膠、瓊膠、硫瓊膠以及化學(xué)處理得到的脫硫κ-,λ-卡拉膠為原料,采用弱酸降解制備各種寡糖混合物,通過(guò)低壓凝膠滲透色譜(Low pressure gel permeation chromatography,LPGPC)技術(shù)獲得各系列寡糖單體37個(gè),其中9個(gè)為首次獲得。通過(guò)電噴霧離子化質(zhì)譜(Electrospray ionization mass chromatography,ESI-MS)方法

2、對(duì)所得寡糖結(jié)構(gòu)和序列進(jìn)行了確證。以制備的半乳寡糖為原料,通過(guò)還原胺化法將其與具有氨基的磷脂(DHPE)偶聯(lián),制備了40個(gè)擬半乳寡糖脂,其中14個(gè)為首次獲得。
　　 以制備的擬糖脂為原料,考察了四種構(gòu)建糖芯片的方法,即薄層點(diǎn)樣儀制備微型糖芯片、手動(dòng)點(diǎn)樣儀制備微型糖芯片、薄層點(diǎn)樣儀制備min-糖芯片和全自動(dòng)芯片點(diǎn)樣儀制備高密度糖芯片的優(yōu)缺點(diǎn)。結(jié)果表明,mini-糖芯片適合于海洋糖芯片的構(gòu)建,而微型芯片適用于糖與蛋白結(jié)合實(shí)驗(yàn)的條件摸索

3、。利用mini-糖芯片技術(shù)和ELISA實(shí)驗(yàn)方法對(duì)各半乳寡糖與RCA120結(jié)合,首次研究發(fā)現(xiàn)RCA120特異性識(shí)別非還原端為Galβ1,4anGal結(jié)構(gòu)的寡糖,進(jìn)一步研究還發(fā)現(xiàn):(1)非還原端Gal的C-2或C-6位被硫酸基取代后,可增強(qiáng)其與RCA120的親和力;(2)非還原端Gal的C-4位被硫酸基取代后,會(huì)失去與RCA120的親和力,除去C-4位硫酸基后親和力將顯著升高;(3)非還原端Gal的C-3位被僅α-Gal取代后,對(duì)RCA12

4、0親和力無(wú)影響,但被α-L-anGal取代后,將完全失去與RCA120結(jié)合能力。各半乳寡糖與RCA120的親和力順序?yàn)?Ga16Sβ1,4anGal(L)-R＞Gal2Sβ1,4Ga12S6S-R＞Galβ1,4anGal(L)-R＞Galβ1,4GlcNAc-R＞Galβ1,4anGal(D)-R＞Galβ1,4Gal-R≈Galal,3Galβ1,4Gal-R＞Gal4Sβ1,4anGal(D)-R≈Galβ1,3GlcNAc-R≈

5、Neu5Acα2,6Galβ1,4GlcNAc-R≈anGal(L)αl,3Gal6Sβ1,4anGal(L)-R(R代表單糖或寡糖)。ECL特異性識(shí)別含有乳糖胺(Galβ1,4GlcNAc-R)結(jié)構(gòu)單元,非還原端Gal羥基被任何其它基團(tuán)取代后,都影響其親和力,但非還原端為Galβ1,4anGal(L or D)結(jié)構(gòu)的寡糖與ECL有微弱的結(jié)合力。
　　 此外,利用構(gòu)建的mini-糖芯片技術(shù)還研究了30種半乳寡糖與Galectin