信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄活化子6在大鼠肺纖維化模型中的表達(dá)與作用機(jī)制.pdf

1、目的：特發(fā)性肺纖維化是一種慢性、呈進(jìn)展性的，常可致死的肺部疾病，其病理上以不明原因的肺實(shí)質(zhì)纖維化為特點(diǎn)。肺實(shí)質(zhì)的纖維化源于肺泡上皮的損傷和抗纖維化-促纖維化平衡失調(diào)的異常損傷修復(fù)，其與炎癥細(xì)胞產(chǎn)生的不同細(xì)胞因子相關(guān)，在此基礎(chǔ)之上將細(xì)胞因子分為Th1型和Th2型細(xì)胞因子。在IPF病人的肺實(shí)質(zhì)中，免疫極化偏向Th2型細(xì)胞因子占主導(dǎo)優(yōu)勢(shì)，Th2型細(xì)胞因子(IL-4，IL-13)活化成纖維細(xì)胞，并誘導(dǎo)其產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)。IL-4活化幾種信號(hào)途徑，

2、如JAK/STAT6和胰島素受體底物家族。在IL-4的刺激下，STAT6單體蛋白聚集到IL-4受體的α鏈，其641位酪氨酸被JAK1和/或JAK3磷酸化。磷酸化的STAT6二聚體移位進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，同特異性的DNA結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，活化IL-4靶基因的轉(zhuǎn)錄。STAT6是Th2型應(yīng)答的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，但是目前關(guān)于STAT6在IPF中的報(bào)道很少。因此，試圖通過(guò)復(fù)制大鼠肺纖維化模型，研究STAT6在博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化中的表達(dá)情況和可能的機(jī)制。

3、 方法：32口雌性wistar大鼠(體重200±50g)分為兩個(gè)組，博萊霉素組24只(BLM組)和生理鹽水對(duì)照組8只(NS組)。再將博萊霉素組按照時(shí)間隨機(jī)分為1天、14天與28天組，每組8只，分別被命名為BLM1天組、BLM14天組、BLM28天組。通過(guò)腹腔注射博萊霉素(7.5mg/kg)，造成大鼠肺纖維化，對(duì)照組腹腔注射等體積的生理鹽水。分別在最后一次注射博萊霉素后的第1，14，28天處死博萊霉素組各8 K大鼠，在第28天處死

4、對(duì)照組8只大鼠。接下來(lái)作下列檢測(cè)： (1)肺組織切片HE和masson染色； (2)肺組織羥脯氨酸含量測(cè)定； (3)STAT6蛋白在肺泡巨噬細(xì)胞和肺組織中的免疫組織化學(xué)染色； (4)免疫組織化學(xué)檢測(cè)肺組織中Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)； (5)免疫印跡檢測(cè)肺組織中磷酸化STAT6的表達(dá)； (6)測(cè)定支氣管肺泡灌洗液中IL-4水平。 結(jié)果： (1)在經(jīng)博萊霉素處理后的第1天，肺組織中有

5、大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡間隔增厚，肺泡腔消失；14天后，出現(xiàn)膠原增殖；在28天時(shí)，穩(wěn)定的肺纖維化形成，masson染色見大量綠色膠原纖維。肺纖維化評(píng)分，第28天評(píng)分較第1和14天高(P＜0.05)。 (2)在BLM組，第1、14、和28天組肺組織羥脯氨酸含量高于對(duì)照組(P＜0.01)。第28天肺組織中羥脯氨酸含量高于第1、14天組(P＜0.05)。 (3)經(jīng)博萊霉素處理后的第1天，大鼠肺泡巨噬細(xì)胞和肺組織中STAT6蛋白

6、的表達(dá)開始升高。在第28天時(shí)，表達(dá)量有輕微下降。 (4)博萊霉素組第1和14天時(shí)肺組織中磷酸化STAT6的表達(dá)較對(duì)照組和博萊霉素組28天時(shí)高。在14天時(shí)顯著升高。 (5)博萊霉素組第1、14天時(shí)肺泡灌洗液中IL-4水平較對(duì)照組升高(P＜0.01)，28天時(shí)和對(duì)照組無(wú)明顯差別。 (6)博萊霉素組內(nèi)可見Ⅰ型膠原在肺泡上皮細(xì)胞、氣道纖毛上皮細(xì)胞和纖維化病灶中的成纖維細(xì)胞中表達(dá)。在第1、14和28天，肺組織中Ⅰ型膠原蛋白