耳聾基因GJB2的突變分析及其與臨床相關(guān)性的研究.pdf

1、第一部分 遺傳性耳聾基因GJB2突變的檢測與分析 目的：通過分析蘇州地區(qū)耳聾人群中GJB2基因突變的頻率，突變類型，為建立一種較為實(shí)用的檢測方法常規(guī)應(yīng)用于臨床提供依據(jù)。 方法：收集散發(fā)性耳聾患者85人，和健康聽力對(duì)照組100人的外周血DNA樣本。PCR擴(kuò)增GJB2基因片段，用直接測序法進(jìn)行序列分析。 結(jié)果：85例散發(fā)性耳聾患者中發(fā)現(xiàn)了11種變異：3種缺失／框移突變，235delC，299-300delAT

2、，176-191dell6；2種錯(cuò)義突變V37I與E47X；1種未知突變；5種多態(tài)性改變V27I、E114G、1203T、V190V和T86R。其中176．191dell6、E47X、V190V和T86R在中國人群中未見報(bào)道。235delc是最主要的突變，等位基因頻率為24．1％，有17例是235delc純合性缺失。正常人中檢測到GJB2基因變異5種：V27I、V37I、E114G、299-300delAT和T123N，其中V27I和E

3、¨4G是最常見的多態(tài)性類型，它們的等位基因頻率分別為28％、12％。 結(jié)論：GJB2基因突變是非綜合征性遺傳性耳聾的主要致病原因，研究結(jié)果可為臨床上開展遺傳性耳聾基因的常規(guī)篩查提供依據(jù)，并且有助于臨床上應(yīng)用基因診斷來鑒別耳聾的病因。 第二部分 GJB2基因突變的家系分析及其與耳聾臨床的相關(guān)性 目的：通過對(duì)具有GJB2基因突變的散發(fā)性耳聾患者的家系進(jìn)行GJB2基因的檢測，研究這些突變與耳聾發(fā)生的相關(guān)性。

4、 方法：收集耳聾患者中具有GJB2基因突變家系11個(gè)，PCR體外擴(kuò)增GJB2基因片段，直接測序法進(jìn)行序列分析。 結(jié)果：235delc是最常見的致病性突變，純合突變導(dǎo)致常染色體隱性遺傳性耳聾，患者多為雙耳重深度耳聾(雙耳大于90dB)，9例均在O．1．5歲發(fā)病；V37I純合性突變患者l例為中度耳聾；不僅純合突變可以致聾，235delc和其它致病突變位于兩條不同的染色體上形成雙重雜合性突變時(shí)，也可以導(dǎo)致耳聾，其父母均為此突變的雜

5、合攜帶者。 結(jié)論：GJB2基因突變所致的耳聾患者大多數(shù)為常染色體隱性遺傳，學(xué)語前致聾，耳聾程度多為重深度耳聾，雙耳聽力多成對(duì)稱性，聽力損傷大多數(shù)無進(jìn)行性發(fā)展。 第三部分 快速檢測GJB2基因235delC突變的方法建立及臨床應(yīng)用 目的：通過對(duì)235delc突變的研究，建立一種簡便，快速的方法應(yīng)用于臨床耳聾基因診斷和產(chǎn)前診斷。 方法：收集5例235delC突變的家系成員15人，正常人l0人，利用聚合

6、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析，直接測序法驗(yàn)證。 結(jié)果：235delc純合突變患者的PCR產(chǎn)物未能被ApaI限制性內(nèi)切酶切開，電泳結(jié)果顯示844bp一條條帶；家系成員中攜帶者的PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切后，電泳結(jié)果顯示844bp、333bp、5¨bp三條條帶；正常對(duì)照者PCR產(chǎn)物經(jīng)酶切后，電泳結(jié)果顯示333bp、511bp兩條條帶。 結(jié)論：在已知家系中有235delc突變的情況下，應(yīng)用PCR-RFLP