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文檔簡介
1、目的：研究融合蛋白VEGF-TCS的原核表達、純化及其對宮頸癌HeLa細胞的影響,以期為宮頸癌的治療尋找新的方法。
方法：重疊延伸PCR得到目的片段VEGF-Linker,克隆入表達載體pET-28a(+)-TCS,將成功構(gòu)建的質(zhì)粒pET-28a(+)-VEGF-Linker-TCS轉(zhuǎn)化入E.coli BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導表達,用Ni-NTA樹脂對誘導表達的融合蛋白進行純化,Western-blot鑒定純化后融合
2、蛋白,MTT法分別檢測不同濃度的VEGF-TCS及TCS對 Hela細胞生長的影響,用流式細胞儀分別檢測VEGF-TCS及TCS對Hela細胞凋亡的作用。
結(jié)果：(1)成功構(gòu)建原核表達pET-28a(+)-VEGF-Linker-TCS。(2)經(jīng) IPTG誘導表達后用Ni-NTA樹脂純化后可以獲得融合蛋白 VEGF-TCS。(3)MTT法顯示 VEGF-TCS和TCS對 Hela細胞增長都具有抑制作用且隨著應用濃度的增加,細胞
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