環(huán)氧化酶-2選擇性抑制劑聯(lián)合奧沙利鉑對結(jié)腸癌細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、結(jié)腸癌是一種較為常見的消化道腫瘤，其傳統(tǒng)的治療原則以手術(shù)為主的綜合治療，同時聯(lián)合化療、放療等降低手術(shù)后的復(fù)發(fā)率，提高患者的生存率。對于復(fù)發(fā)性或轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌，其中綜合治療在化療中占主要地位。近年來研究發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶-2(COX-2)可以通過其多種途徑參與腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，可以抑制腫瘤細胞的凋亡，促進新生血管的生成。本實驗通過奧沙利鉑(L-OHP)，COX-2抑制劑NS-398及奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對結(jié)腸癌HCT-8細胞體外培養(yǎng)，研究其以

2、上物質(zhì)對細胞增殖和凋亡的影響。
　　為初步觀察與奧沙利鉑聯(lián)合作用的NS-398對HCT-8細胞在倒置顯微鏡下觀察到奧沙利鉑和奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對結(jié)腸癌HCT-8細胞的生長影響。結(jié)果出現(xiàn)奧沙利鉑和NS-398濃度的添加使其增高的細胞逐漸減少，變圓，貼壁細胞出現(xiàn)漂浮，折光性差。
　　接著運用CCK-8實驗檢測不同濃度奧沙利鉑單用(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 mg·L-1)，奧沙利鉑聯(lián)合NS-398

3、（20.00、80.00μmol·L-1）對HCT-8細胞作用24h的細胞抑制率;其運用Annexin V-FITC和PI雙染流式細胞術(shù)檢測奧沙利鉑(10.00 mg·L-1)、 NS-398(50.00 mg·L-1)單用及奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對HCT-8細胞作用24h的早期凋亡情況;并用流式細胞術(shù)檢測奧沙利鉑，NS-398單用及奧沙利鉑聯(lián)合NS-398對HCT-8細胞48h的細胞周期變化。為進一步研究觀察奧沙利鉑和NS-398對

4、細胞有無協(xié)同效應(yīng)，運用瓊脂糖凝膠電泳檢測奧沙利鉑單用(2.50、5.00、10.00、20.00mg·L-1)及聯(lián)合NS-398（10.00、100.00μmol·L-1）對HCT-8細胞作用48h的DNA Ladder情況;利用熒光顯微鏡觀察細胞凋亡作用48h時凋亡情況。Caspase-3活性檢測奧沙利鉑和NS-398單用及聯(lián)合作用48h時結(jié)腸癌HCT-8細胞中Caspase-3活性增高的變化。
　　實驗發(fā)現(xiàn):奧沙利鉑，NS-3

5、98對HCT-8細胞呈劑量性的依賴抑制作用(P＜0.05)。奧沙利鉑聯(lián)合NS-398作用組的HCT-8細胞增殖抑制率明顯高于同一濃度的奧沙利鉑單用組，并且隨著NS-398添加劑量而增加。Annexin V-FITC檢測細胞早期凋亡顯示奧沙利鉑呈劑量依賴性的誘導(dǎo)細胞凋亡和細胞死亡，聯(lián)合作用組對HCT-8細胞明顯強于單用奧沙利鉑對HCT-8細胞的作用，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）;細胞周期顯示，奧沙利鉑，NS-398及聯(lián)合作用組HCT

6、-8細胞48h后對照組相比，細胞周期能被阻滯，奧沙利鉑將HCT-8細胞的S期阻滯，NS-398將HCT-8細胞的G0/G1期阻滯，奧沙利鉑和NS-398可誘導(dǎo)結(jié)腸癌HCT-8細胞凋亡，對NS-398添加的奧沙利鉑細胞凋亡明顯增加。瓊脂糖凝膠電泳顯示奧沙利鉑，NS-398聯(lián)合作用結(jié)腸癌HCT-8細胞48h能檢測到DNA Ladder，NS-398不同劑量添加奧沙利鉑，DNA梯狀條帶亮于奧沙利鉑組。Hoechst33258熒光顯微鏡觀察細胞

7、凋亡作用48h時，正常細胞核呈彌散均勻的藍色，而凋亡細胞的細胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀，顏色有些發(fā)白，聯(lián)合用藥后可見凋亡細胞明顯。Caspase-3活性檢測奧沙利鉑和NS-398單獨作用對結(jié)腸癌HCT-8細胞中Caspase-3活性增高。兩藥聯(lián)合作用時對結(jié)腸癌HCT-8細胞中Caspase-3活性起加強作用，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01），二者具有協(xié)同作用。
　　COX-2選擇性抑制劑NS-398，奧沙利鉑對結(jié)腸癌HCT-8細