過氯酸銨對(duì)甲狀腺特異性基因表達(dá)及作業(yè)工人激素水平影響的研究.pdf

1、第一部分、過氯酸銨對(duì)大鼠甲狀腺功能形態(tài)及特異性基因表達(dá)影響的研究
　　 一．過氯酸銨對(duì)大鼠生長(zhǎng)發(fā)育及甲狀腺功能形態(tài)的影響
　　 目的：研究AP對(duì)大鼠體重增長(zhǎng)、臟器系數(shù)、甲狀腺激素水平及甲狀腺形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。全面探討AP對(duì)大鼠甲狀腺功能形態(tài)的毒理學(xué)作用。
　　 方法：（1）動(dòng)物模型及分組：采用健康的SD雄性大鼠30只，隨機(jī)分為6組，每組5只。分組及染毒劑量為：對(duì)照組(僅喂正常飼料，含碘量470μg/kg)、AP低劑

2、量組(130mg/kg/day)、AP中劑量組(260mg/kg/day)、AP高劑量組(520mg/kg/day)、低碘組(僅喂低碘飼料，含碘量50μg/kg)、AP聯(lián)合高碘組(AP 520mg/kg/day+碘10mg/L飲水)。用去離子水溶解AP配制相應(yīng)濃度的染毒溶液。采用經(jīng)口灌胃方式，每天給各劑量組大鼠不同濃度的AP溶液染毒，連續(xù)染毒90天(13周)。（2）測(cè)定指標(biāo)及方法：各組大鼠每周定時(shí)稱量一次體重并記錄其變化。染毒90天后處

3、死大鼠，取大鼠甲狀腺、心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟及睪丸組織進(jìn)行稱量，計(jì)算各個(gè)臟器的臟器系數(shù)；各組大鼠從染毒開始的第30天、60天、90天分別進(jìn)行眼眶靜脈采血，分離出血清后測(cè)定血清中游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)以及促甲狀腺激素(TSH)水平；90天時(shí)取大鼠甲狀腺組織制作HE染色的常規(guī)病理切片，觀察甲狀腺組織的病理變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、體重及臟器系數(shù) AP高劑量組和低碘組大鼠的體重增長(zhǎng)顯

4、著低于對(duì)照組大鼠的體重增長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；AP染毒可以引起大鼠甲狀腺組織腫大。AP高劑量組大鼠甲狀腺組織重量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，AP高劑量組和低碘組大鼠的甲狀腺臟器系數(shù)均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；AP高劑量組大鼠心臟器系數(shù)顯著低于對(duì)照組大鼠(P<0.05)。AP高劑量組大鼠脾臟器系數(shù)顯著低于對(duì)照組大鼠(P<0.05)。AP高劑量組及低碘組大鼠睪丸臟器系數(shù)顯著高于對(duì)照組

5、大鼠(P<0.05)；
　　 2、甲狀腺激素水平大鼠經(jīng)AP染毒90天，各組大鼠血清FT3水平與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。但AP中、高劑量組及低碘組大鼠血清FT4水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)。AP高劑量組及低碘組大鼠血清TSH水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；
　　 3、甲狀腺組織病理變化甲狀腺組織常規(guī)病理圖片可見：對(duì)照組甲狀腺濾泡腔大小不一，呈不規(guī)則橢圓形。濾泡腔內(nèi)充滿粉紅色膠

6、質(zhì)，為正常甲狀腺細(xì)胞。AP低劑量組甲狀腺濾泡腔面積變小，濾泡腔中的膠質(zhì)淡染。濾泡上皮細(xì)胞稍顯增大。AP中劑量組甲狀腺濾泡腔明顯縮小，膠質(zhì)不明顯。濾泡上皮細(xì)胞廣泛增生。細(xì)胞間質(zhì)膠原增生，間質(zhì)充血。AP高劑量組甲狀腺濾泡腔幾近閉鎖，濾泡腔內(nèi)無膠質(zhì)，細(xì)胞間質(zhì)充血嚴(yán)重。低碘組甲狀腺濾泡腔明顯縮小，無膠質(zhì)。濾泡上皮細(xì)胞廣泛增生。細(xì)胞間質(zhì)膠原增生，間質(zhì)充血。聯(lián)合組甲狀腺濾泡腔增大，內(nèi)含豐富的粉紅色膠質(zhì)。濾泡大小不一，呈不規(guī)則橢圓形。
　　

7、結(jié)論：（1）AP能影響實(shí)驗(yàn)大鼠的正常生長(zhǎng)發(fā)育過程，引起發(fā)育遲緩。（2）AP可以使大鼠血清中FT4水平下降和引起TSH水平反饋性升高，干擾甲狀腺激素的正常水平及合成功能。（3）AP可以引起甲狀腺腺體發(fā)生腫大，導(dǎo)致甲狀腺細(xì)胞結(jié)構(gòu)的病理性改變，主要表現(xiàn)為甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞增厚、細(xì)胞間質(zhì)充血，濾泡腔面積變小甚至閉鎖，濾泡腔中的膠質(zhì)消失。
　　 二．過氯酸銨對(duì)大鼠甲狀腺特異性基因mRNA和蛋白表達(dá)的影響
　　 目的：通過測(cè)定甲狀腺

8、特異性基因NIS、Tg、TPO mRNA和蛋白水平表達(dá)的變化，來探討AP對(duì)甲狀腺激素合成過程的影響，并測(cè)定甲狀腺特異性轉(zhuǎn)錄因子TTF-1、Pax8以及 Foxe1 mRNA表達(dá)變化，從分子水平上對(duì)AP所致的甲狀腺毒作用進(jìn)行深入的研究和探索。
　　 方法：采用熒光定量PCR測(cè)定大鼠甲狀腺組織中NIS、Tg、TPO、TTF-1、Pax8以及 Foxe1 mRNA水平的變化；采用Western blotting測(cè)定甲狀腺組織中NIS、

9、Tg、TPO在蛋白水平的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、甲狀腺特異性基因及轉(zhuǎn)錄因子mRNA表達(dá)變化與對(duì)照組比較，AP各劑量組大鼠甲狀腺NIS的mRNA表達(dá)相對(duì)值有升高的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；AP低、中、高劑量組大鼠Tg的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比呈顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；低碘組及AP聯(lián)合高碘組大鼠Tg的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；AP高劑量組大

10、鼠甲狀腺TPO基因mRNA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP高劑量組及低碘組大鼠甲狀腺TTF-1的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較呈顯著性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AP中、高劑量組大鼠甲狀腺的Foxe1 mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)；各處理組大鼠甲狀腺Pax8的mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 2、NI

11、S、Tg、TPO蛋白表達(dá)變化 AP各劑量組大鼠甲狀腺NIS蛋白表達(dá)水平無顯著性變化，與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；AP低、中、高劑量組大鼠Tg 蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比呈降低的趨勢(shì)，但只有高劑量組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；高劑量組大鼠TPO蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比呈顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP低、中、劑量組大鼠TPO蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比呈逐漸降低的趨勢(shì)，但差異尚無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

12、＞0.05）。
　　 結(jié)論：（1）AP可以抑制Tg及TPO基因的mRNA及蛋白表達(dá)水平。這兩種關(guān)鍵基因的表達(dá)水平下調(diào)，提示AP 可以抑制甲狀腺激素合成的關(guān)鍵基因的表達(dá)，直接影響甲狀腺激素的合成過程。（2）AP可能是通過抑制或干擾甲狀腺特異性轉(zhuǎn)錄因子TTF-1及Foxe1，抑制Tg及TPO基因的表達(dá)。
　　 第二部分、過氯酸銨粉塵對(duì)作業(yè)工人甲狀腺激素水平影響的研究
　　 目的：為了解AP粉塵對(duì)作業(yè)工人甲狀腺功能的影

13、響，對(duì)遼寧、陜西、內(nèi)蒙古及湖北等地的甲、乙、丙、丁四個(gè)AP工廠進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)勞動(dòng)衛(wèi)生學(xué)調(diào)查。為保護(hù)工人健康、預(yù)防控制AP粉塵的職業(yè)危害提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：采用FC-2型粉塵采樣器測(cè)定AP作業(yè)車間空氣中的AP粉塵濃度；對(duì)AP作業(yè)工人進(jìn)行健康檢查，項(xiàng)目包括個(gè)人職業(yè)史、既往史、吸煙史、臨床表現(xiàn)及一般內(nèi)科檢查。實(shí)驗(yàn)室檢查包括：血常規(guī)：白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)計(jì)數(shù)、血紅蛋白(Hb)含量；肝功能：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、肌酐

14、(CR)、尿素氮(BUN)；甲狀腺激素水平：游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)。
　　 結(jié)果：AP粉塵是AP作業(yè)場(chǎng)所主要的職業(yè)性有害因素，AP粉塵監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示：甲廠的組批車間（51.63mg/m3），乙廠的粉碎車間（61.09mg/m3）、過篩車間（55.88mg/m3），丙廠的粉碎車間（55.13mg/m3）、過篩車間（26.34mg/m3）的AP粉塵濃度較高，均超出美國(guó)職業(yè)安全衛(wèi)生

15、管理局（OSHA）提出的15mg/m3 （總塵）的時(shí)間加權(quán)平均容許接觸限值（PEL-TWA）；AP接觸組工人的呼吸系統(tǒng)癥狀檢出率（32.17％）比對(duì)照組（15.91％）顯著上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；AP接觸組與對(duì)照組的各項(xiàng)血液、肝、腎功能指標(biāo)相比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；甲廠AP接觸組工人的FT3水平（1.29 pmol/L）與對(duì)照組（1.41pmol/L）相比有顯著性降低（P<0.05），乙、丙、丁三個(gè)廠的甲狀腺激素水平則

16、未見異常變化。
　　 結(jié)論：（1）AP作業(yè)場(chǎng)所部分車間的AP粉塵濃度較高，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)AP生產(chǎn)作業(yè)場(chǎng)所的除塵控塵措施，提高AP作業(yè)工人的個(gè)人防護(hù)水平。（2）AP接觸組工人的呼吸系統(tǒng)癥狀檢出率顯著上升，表明AP對(duì)呼吸系統(tǒng)有損害作用。（3）AP對(duì)作業(yè)工人的血液系統(tǒng)、肝、腎功能未產(chǎn)生明顯的影響。（4）AP可顯著性降低甲廠接觸組工人的FT3水平，表明AP粉塵暴露可以對(duì)作業(yè)工人的甲狀腺功能產(chǎn)生一定程度的有害影響，應(yīng)加強(qiáng)AP作業(yè)工人的職業(yè)防護(hù)措