膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索.pdf

1、目的:
　　1、擬采用3D培養(yǎng)技術(shù)模擬體內(nèi)環(huán)境研究膠質(zhì)瘤干細(xì)胞增殖的異質(zhì)性及一些生物特性。
　　2、在體外進(jìn)行人工合成核酸適體文庫合成，使用Cell-SELEX技術(shù)進(jìn)行篩選，以期得到可以特異性識(shí)別膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的核酸適體。
　　方法：
　　1、利用微孔陣列芯片技術(shù)制作出高通量微膠原蛋白陣列，然后使用固定力的按壓方式，使細(xì)胞均勻分布于陣列中，形成三維培養(yǎng)模型。三維長期培養(yǎng)條件下，進(jìn)行高通量膠質(zhì)瘤干細(xì)胞單細(xì)胞異質(zhì)性分析

2、。
　　2、使用化學(xué)方法人工合成的隨機(jī)寡核苷酸庫，以體外培養(yǎng)的的人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞誘導(dǎo)出的膠質(zhì)瘤干細(xì)胞為靶細(xì)胞，以人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U251細(xì)胞為反篩細(xì)胞，利用Cell-SELEX技術(shù)，進(jìn)行核酸適體篩選。
　　結(jié)果：
　　1、膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以高通量微膠原蛋白陣列中長期存活，并且增殖，細(xì)胞活性沒有影響。
　　2、經(jīng)過7天、30天培養(yǎng)，觀察、鑒定，3D培養(yǎng)條件下可以觀察到膠質(zhì)瘤干細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞之間的增

3、殖能力差異及各自細(xì)胞傳代過程中異質(zhì)性。
　　3、經(jīng)過15輪循環(huán)的篩選得到了可以結(jié)合膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的核酸適體文庫
　　4、這個(gè)核酸適體庫可以很好地與人腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞結(jié)合，而不與人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251相結(jié)合。
　　結(jié)論：
　　1、建立了一種高通量單細(xì)胞三維培養(yǎng)平臺(tái)，用于膠質(zhì)瘤干細(xì)胞細(xì)胞異質(zhì)性的分析。膠質(zhì)瘤子細(xì)胞傳代具有局限性，而膠質(zhì)瘤干細(xì)胞幾乎可以無限增殖。
　　2、篩選得到的核酸適配體庫可以特異性的結(jié)合于靶細(xì)