甲狀腺激素-整合素αvβ3-HDAC5通路調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖的研究.pdf

1、目的: 甲狀腺激素對(duì)腫瘤的生長作用已經(jīng)得到了普遍的認(rèn)可，但甲狀腺激素促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖作用還未明確，有待進(jìn)一步的探索。大量研究表明，整合素αvβ3在腫瘤細(xì)胞的增殖和腫瘤的血管形成中有重要作用，整合素αvβ3為這兩種作用的一個(gè)共同起始點(diǎn)。本研究利用人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SNB19)為研究對(duì)象，以整合素αvβ3為切入點(diǎn)，通過甲狀腺激素（主要為T4）、甲狀腺激素類似物(Tetrac)及蛋白激酶(PKC)抑制劑(Bis)的作用，研究腫瘤細(xì)胞的PK

2、C/蛋白激酶(PKD1)/組蛋白去乙酰化酶(HDAC)5信號(hào)通路以及絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)/細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)1/2信號(hào)通路，證明甲狀腺激素可以通過該通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。
　　內(nèi)容: 本實(shí)驗(yàn)以人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SNB19)為研究對(duì)象，給予甲狀腺激素T4、Tetrac及Bis進(jìn)行干預(yù)，通過Western印記、3-(4，5)-2-唑噻-(2，5)-二苯基溴化四氮唑藍(lán)(MTT)比色法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)

3、實(shí)驗(yàn)技術(shù)，研究甲狀腺激素T4通過PKC/PKD1/HDAC5信號(hào)通路以及MAPK/ERK1/2信號(hào)通路對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖作用。
　　方法:
　　(1)將SNB19細(xì)胞分為正常對(duì)照組、T4(100nmol/L，干預(yù)30min)組、Tetrac（100nmol/L，提前干預(yù)30min）組、T4（100nmol/L，干預(yù)30min）+Tetrac（100nmol/L，提前干預(yù)30min）組，應(yīng)用Western印記實(shí)驗(yàn)技術(shù)分別檢測蛋白激

4、酶D1(PKD1)、組蛋白去乙?；?(HDAC5)的磷酸化、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化。
　　(2)將SNB19細(xì)胞分為正常對(duì)照組、T4(100nmol/L，干預(yù)30min)組、Bis(2.5μmol/L，提前干預(yù)30min)組、T4（100nmol/L，干預(yù)30min）+Bis(2.5μmol/L，提前干預(yù)30min)組，應(yīng)用Western印記實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測蛋白激酶D1(PKD1)的磷酸化。
　　(3

5、)將SNB19細(xì)胞分為正常對(duì)照組、T4組(100nmol/L)、Tetrac(100nmol/L)組、T4(100nmol/L)+Tetrac（100nmol/L）組，通過MTT實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)490nmOD值，反映SNB19細(xì)胞增殖情況。
　　(4)將SNB19細(xì)胞分為正常對(duì)照組、T4(100nmol/L)組、Tetrac(100nmol/L)ZU、T4(100nmol/L)+Tetrac(100nmol

6、/L)組，通過ELISA實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測干預(yù)72hSNB19細(xì)胞培養(yǎng)上清VEGF的表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　(1) Western印記:與正常對(duì)照組相比，T4干預(yù)組PKD1、HDAC5、ERK1/2磷酸化水平均升高(P＜0.05)。與T4干預(yù)組相比，Tetrac干預(yù)組和T4+Tetrac干預(yù)組PKD1、HDAC5、ERK1/2磷酸化水平均降低(P＜0.05)，Bis干預(yù)組和T4+Bis干預(yù)組PKD1磷酸化水平均降低(P＜0.05

7、)。
　　(2) MTT:與正常對(duì)照組相比，T4干預(yù)組OD值升高(P＜0.05)。與T4干預(yù)組相比，Tetrac干預(yù)組和T4+Tetrac干預(yù)組OD值均降低(P＜0.05)。
　　(3) ELISA:與正常對(duì)照組相比，T4干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)上清VEGF濃度較高(P＜0.05)，Tetrac干預(yù)組及Tetrac+T4干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)上清VEGF濃度較低（P＜0.05）。
　　結(jié)論: 甲狀腺激素T4作用于腫瘤細(xì)胞膜上膜受體整合素