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文檔簡介
1、目的:觀察Rho/ROCK細(xì)胞信號通路對體外培養(yǎng)的U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長、遷徙及侵潤轉(zhuǎn)移能力的影響,并探討其作用機(jī)制。
方法:體外培養(yǎng)U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞,U87細(xì)胞經(jīng)不同濃度(0、5、10、25、50、100μmol/L)的Y-27632作用不同時間(12h、24h、)后,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測Y-27632對U87細(xì)胞生長的影響。Transwell細(xì)胞運動、侵襲模型試驗分別檢測U87細(xì)胞經(jīng)不同濃度(0、10、25、5
2、0μmol/L)的Y-27632處理12小時后的遷徙、侵襲能力的變化。應(yīng)用Rho激酶活性檢測試劑盒檢測不同濃度的Y-27632對細(xì)胞中ROCK活性的影響。蛋白免疫印記法檢測經(jīng)不同濃度(0、10、25、50μmol/L)的Y-27632處理12小時后的U87細(xì)胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平的變化。
結(jié)果: MTT實驗表明不同濃度的Y-27632對U87細(xì)胞的生長增殖沒有明顯影響。Transwell細(xì)胞運動、侵襲模型實驗結(jié)果顯
3、示隨著Y-27632實驗濃度的增加,U87細(xì)胞的運動、侵襲能力逐漸降低。Rho激酶活性檢測結(jié)果顯示隨著Y-27632濃度的提高,U87細(xì)胞中ROCK活性逐漸抑制,在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性。蛋白免疫印記法檢測表明隨著 Y-27632實驗濃度的增加,細(xì)胞中 MMP-2、MMP-9蛋白水平逐漸降低,以MMP-2蛋白為著。
結(jié)論:體外實驗結(jié)果表明,Rho/ROCK細(xì)胞信號通路的阻斷能降低 U87細(xì)胞的遷徙、侵襲能力,同時細(xì)胞中 MMP
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