α-synuclein對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GDNF及調(diào)控神經(jīng)元軸突生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的:研究過(guò)表達(dá)α-synuclein野生型和突變體(A30P、A53T)對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte，AST)分泌膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(glia-derived neurotrophic factor，GDNF)的影響，以及對(duì)神經(jīng)元的軸突生長(zhǎng)的影響。
　　方法:分離純化新生1-3天的雄性大鼠皮質(zhì)區(qū)AST和新生24小時(shí)內(nèi)的雄性大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元，Western blot檢測(cè)AST中內(nèi)源性α-synuclein的表達(dá)。用293FT

2、細(xì)胞對(duì)前期已構(gòu)建好的α-synuclein(WY/MU)-HA-FUIGW-GFP及FUIGW-GFP慢病毒載體進(jìn)行包裝，收獲的病毒上清在體外感染原代培養(yǎng)的AST，分為Fuigw組、WT組、A30P組及A53T組，其中Fuigw組為空白對(duì)照組。使用免疫熒光染色及Western blot檢測(cè)AST中野生型及突變型α-synuclein的表達(dá)后，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(enzyme-linkedimmunosorben assay，ELISA)

3、檢測(cè)各組轉(zhuǎn)染后AST培養(yǎng)上清中GDNF水平;用Transwell培養(yǎng)皿將感染后的AST與分離純化的神經(jīng)元進(jìn)行共培養(yǎng)，，免疫熒光染色觀察共培養(yǎng)的神經(jīng)元軸突長(zhǎng)度的變化。
　　結(jié)果:
　　1.原代培養(yǎng)的AST中存在內(nèi)源性α-synuclein的表達(dá)。
　　2.免疫熒光染色和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)感染后各組ASTα-synuclein(WT)-HA、α-synuclein(A30P)-HA、α-synuclein(A

4、53T)-HA成功表達(dá)。
　　3.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)WT組、A30P組、及A53T組的培養(yǎng)上清中GDNF濃度均低于FUIGW組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　4.免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)WT組、A30P組及A53T組的神經(jīng)元突起長(zhǎng)度均較FUIGW組短，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　過(guò)表達(dá)野生型及突變型(A30P、A53T)α-synuclein的星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌GDNF減少，可