骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠皮層神經(jīng)元缺氧缺糖損傷后軸突生長及AKT-GSK-3β-CRMP-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本研究旨在通過建立不同細(xì)胞間非接觸共培養(yǎng)模型,來觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)對大鼠皮層神經(jīng)元缺氧缺糖(Oxygen-glucose deprivation,OGD)損傷后軸突的生長及信號通道蛋白AKT/GSK-3β/CRMP-2表達(dá)的影響,以探討B(tài)MSCs對神經(jīng)元損傷后軸突生長的影響及機(jī)制,為干細(xì)胞移植治療缺血性腦血管病提供理論依據(jù)。

2、>　　方法:1、BMSCs和大鼠皮層神經(jīng)元的體外分離培養(yǎng)及鑒定。
　　2、取培養(yǎng)第5d的神經(jīng)元進(jìn)行氧糖剝奪培養(yǎng)90min,建立OGD損傷模型;12小時(shí)后分別通過光鏡和電子顯微鏡觀察神經(jīng)元OGD損傷情況。
　　3、通過transwell載體建立OGD損傷后的神經(jīng)元與第3代BMSCs的非接觸共培養(yǎng)模型,實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為四組:正常對照組(Control組)、OGD模型組(OGD組)、共培養(yǎng)組(OGD+BMSCs組)、藥物干預(yù)組(OGD

3、+BMSCs+LY294002組)。
　　4、各組培養(yǎng)48小時(shí)后進(jìn)行免疫熒光染色后,ZEISSLSM710激光共聚焦顯微鏡拍照,ZEN2009軟件分析測量各組軸突的長度。
　　5、各組培養(yǎng)24小時(shí)后通過westernblot檢測AKT、pAKT、GSK-3β、pGSK-3β、CRMP-2、pCRMP-2、GAP-43蛋白的表達(dá)量。
　　6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果:1、OGD培養(yǎng)后的神經(jīng)元軸突受損縮短、部分缺失,線

4、粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等亞細(xì)胞器腫脹、部分溶解。
　　2、軸突平均長度測量結(jié)果顯示:OGD組軸突平均長度較正常組明顯縮短(P<0.01);OGD+BMSCs組的平均軸突長度較OGD組及OGD+BMSCs+LY294002組延長(P<0.05)。
　　3、western blot結(jié)果顯示:OGD+BMSCs組的pAKT、pGSK-3β、GAP-43表達(dá)水平較OGD組及OGD+BMSCs+LY294002組增高(P<0.05),而pCRM