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文檔簡介
1、目的:建立并研究高脂肪飲食導致大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纖維化的動物模型。在非酒精性脂肪性肝炎模型時期,采用低分子量肝素對模型進行干預(yù),觀察低分子量肝素干預(yù)作用。并為后續(xù)研究低分子量肝素對大鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纖維化的干預(yù)作用準備動物模型。
方法:模型的建立階段:雄性SD大鼠60只,隨機分成正常對照組30只和模型組30只,分別給予普通飼料與高脂飼料,于第4、第8及12周末正常組與對照組隨機處死10只。分別檢測血清學指標,取
2、肝組織做HE染色及Masson染色,應(yīng)用圖像分析法對Masson染色進行纖維化面積半定量分析。低分子量肝素干預(yù)階段:雄性SD大鼠40只,隨機分為正常對照組(n=10)及模型組(n=10),模型組喂以高脂飲食共8周;其余20只在高脂飲食8周后分為低分子肝素低劑量治療組(n=10),在繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)的基礎(chǔ)上,加用低分子量肝素治療(50IU/kg/d);低分子肝素高劑量治療組(n=10),在繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)基礎(chǔ)上,加用低分子量肝素治療(20
3、0IU/kg/d),共治療2周。
結(jié)果:模型建立階段:兩組大鼠體重均增加,8周時肝指數(shù)(肝重/體重%)明顯升高,血清膽固醇及總甘油三酯8周開始與正常對照組相比有統(tǒng)計學差異。轉(zhuǎn)氨酶不同時間點均有升高,8周及12周與正常對照組相比有統(tǒng)計學差異。高脂飲食4周末,HE染色可見肝小葉結(jié)構(gòu)完整,匯管區(qū)見少量炎癥細胞浸潤,無病理性纖維化發(fā)生。8周時,大鼠肝組織光鏡下見肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,脂肪變的肝細胞數(shù)占總細胞數(shù)的1/3-2/3,且出現(xiàn)碎屑
4、樣壞死,匯管區(qū)有單核細胞浸潤,炎癥活動度計分明顯高于對照組。造模12周,大鼠肝組織達中至重度肝細胞脂肪變性,肝細胞腫大,且可見小葉炎癥,炎癥細胞以單個核細胞浸潤為主,可見以中央靜脈為中心的壞死條帶延伸。12周,纖維化面積增大,肝小葉結(jié)構(gòu)消失,竇周隙纖維增生明顯,幾乎充滿竇周隙,增生的纖維形成粗條索狀包繞匯管區(qū)并向肝小葉間及肝內(nèi)、肝小葉中心延伸。Masson染色纖維化半定量顯示模型組纖維化面積明顯增大,12周后肝組織纖維化面積與正常對照組
5、比較差異有統(tǒng)計學意義。低分子量肝素干預(yù)階段:LMWH治療后鏡下肝小葉結(jié)構(gòu)較完整,肝細胞再生明顯,雖可見脂肪變肝細胞,但脂肪變程度及炎癥細胞的浸潤程度較模型組明顯減輕。在改善肝細胞脂肪變及炎癥發(fā)生方面,LMWH高劑量治療組作用明顯。經(jīng)過2周治療后,低劑量組在改善脂質(zhì)堆積方面的作用較差,與模型組相比無統(tǒng)計學意義而用高劑量治療的大鼠血清甘油三酯,總膽固醇較模型組顯著下降,且差異有統(tǒng)計學意義。模型組血清中TNF-α的水平較正常組明顯升高且有統(tǒng)計
6、學意義,與模型組相比,經(jīng)LMWH治療后兩組血清中。TNF-α的水平均降低,且呈劑量依賴性。
結(jié)論:
1.造模8周,達非酒精性脂肪性肝炎的診斷標準,為低分子量肝素干預(yù)治療提供模型。
2.造模12周,成功建立了非酒精性脂肪性肝炎肝纖維化模型。
3.低分子量肝素能夠抑制肝臟慢性炎癥的發(fā)生,減少脂質(zhì)在肝臟中的堆積,有治療非酒精性脂肪性肝病的作用。其作用機制可能是調(diào)節(jié)血脂,降低血清中TNF-
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