復(fù)方中藥和微生態(tài)制劑干預(yù)非酒精性脂肪肝炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究通過高脂飲食建立NASH大鼠模型，動(dòng)態(tài)檢測(cè)氧化和抗氧化指標(biāo)、TNFα和PPARγ的表達(dá)，分別應(yīng)用復(fù)方中藥(復(fù)肝健脾沖劑)和微生態(tài)制劑(美常安)進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)實(shí)驗(yàn)性NASH大鼠肝組織的氧化和抗氧化系統(tǒng)、TNFα及PPARγ表達(dá)的影響，以進(jìn)一步探討其防治NASH的作用機(jī)制。 研究方法： 1、動(dòng)物模型的建立及標(biāo)本采集：80只SD大鼠普通飼料喂養(yǎng)1wk后，隨機(jī)分為8組(n=10)。正常組普通飼料喂養(yǎng)；模型Ⅰ、Ⅱ組喂高脂

2、飼料(880g/kg普通飼料+100g/kg豬油+20g/kg膽固醇)；中藥Ⅰ、Ⅱ組分別在喂飼高脂飼料9wk、13wk予復(fù)肝健脾沖劑6000mg/(kg·d)灌胃，每日1次；微生態(tài)制劑Ⅰ、Ⅱ組分別在喂飼高脂飼料9wk、13wk予美常安100mg/(kg·d)灌胃，每日1次；其他組以相同劑量(5ml)蒸餾水罐胃；飲食治療組在喂飼高脂飼料13wk后改為普通飼料喂養(yǎng)。12wk末處死正常組、模型Ⅰ組、中藥Ⅰ組和微生態(tài)制劑Ⅰ組大鼠；剩余4組大鼠繼

3、續(xù)喂養(yǎng)至16wk末處死，迅速取出肝臟，按常規(guī)制備血清、肝勻漿、肝組織石蠟切片標(biāo)本，肝組織于-70℃低溫保存。 2、檢測(cè)指標(biāo)：(1)測(cè)定體質(zhì)量，肝比重(肝濕重/體重×100﹪)和Lee's指數(shù)(體重0.33/體長×100﹪)；(2)采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT，AST，TC，TG和全血GSH-PX(DTNB直接法)；(3)肝勻漿測(cè)定MDA含量(改進(jìn)后的硫代巴比妥酸熒光法)，SOD活性(改良的鹽酸羥胺法)，T-AOC，NO，i

4、NOS，GSH(按試劑盒說明操作)；(4)檢測(cè)血清TNFα水平(酶聯(lián)免疫法)；(5)肝臟病理學(xué)檢查，光鏡下評(píng)估脂肪變性程度和炎癥活動(dòng)情況；免疫組化法測(cè)定PPARγ表達(dá)。 研究結(jié)果： 1、大鼠體質(zhì)指標(biāo)(體質(zhì)量，肝比重，Lee's指數(shù))變化：模型組和飲食組大鼠均呈明顯腹型肥胖狀態(tài)。模型組及飲食組體質(zhì)指標(biāo)與正常組相比顯著增高；中藥和微生態(tài)制劑組體質(zhì)指標(biāo)與模型組比顯著下降。 2、血清生化指標(biāo)(ALT、AST、TG、TC)

5、變化：與正常組比，模型組和飲食組顯著增高；中藥和微生態(tài)制劑組與模型組比較均有不同程度改善。 3、氧化(MDA、iNOS、NO)和抗氧化(SOD、T-AOC、GSH、GSH-PX)指標(biāo)變化：與正常組比較，模型組氧化指標(biāo)顯著增高，抗氧化指標(biāo)下降明顯；與模型組比，中藥和微生態(tài)制劑組氧化指標(biāo)下降，抗氧化指標(biāo)增高顯著。 4、血清TNFα變化：與正常組比，模型組，飲食組和藥物治療組TNFα水平均增高；與模型組比，中藥和微生態(tài)制劑組顯

6、著下降。 5、HE染色觀察：與正常組比，模型組大鼠肝脂肪變明顯加重，炎癥活動(dòng)度計(jì)分顯著增加；中藥和微生態(tài)制劑組大鼠肝脂肪變性程度和炎癥活動(dòng)度計(jì)分較模型組明顯降低，與正常組比無明顯差異；飲食治療組肝脂肪變與模型組無顯著差異，而其炎癥活動(dòng)度計(jì)分較正常組明顯增高。 6、免疫組化法染色：正常組見彌漫性陽性表達(dá)；與正常組比，模型組PPARγ陽性表達(dá)細(xì)胞明顯減少，與脂肪變性的嚴(yán)重程度無關(guān)，而與肝組織的炎癥活動(dòng)度呈負(fù)效關(guān)系；與模型組相

7、比，中藥和微生態(tài)制劑組PPARγ陽性表達(dá)細(xì)胞增多。 研究結(jié)論： 1、長期高脂高膽固醇飲食可建立NASH大鼠模型，模型組大鼠肝臟脂肪變性和炎癥反應(yīng)呈動(dòng)態(tài)進(jìn)展，存在顯著的病理分期。 2、氧應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化在肝組織脂肪變性后炎癥的過程中發(fā)揮重要作用。 3、PPARγ表達(dá)減弱在NASH大鼠模型脂質(zhì)過氧化、炎癥介質(zhì)釋放、肝組織損傷等方面起著關(guān)鍵作用。 4、TNFα為非酒精性脂肪肝發(fā)病過程中胰島素抵抗的一個(gè)關(guān)