非酒精性脂肪肝炎枯否細(xì)胞MR成像的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究以大鼠為研究對(duì)象，在建立非酒精性脂肪肝炎(NASH)的動(dòng)物模型基礎(chǔ)上，采用自行研制的殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe3O4作為磁共振成像的對(duì)比劑，經(jīng)大鼠尾靜脈注射CS-g-PAA/Fe3O4后行1.5T MR增強(qiáng)掃描來(lái)初步評(píng)估大鼠NASH枯否細(xì)胞(KC)的吞噬功能。共分為三個(gè)部分。
　　 第一部分：殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe3O4的制備
　　 目的：用殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS

2、-g-PAA)對(duì)納米Fe3O4進(jìn)行表面改性，使其在中性溶液中仍具備水分散穩(wěn)定性能和超順磁性。
　　 方法：采用接枝聚合的方法制備了殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)表面改性Fe3O4并得到其水分散穩(wěn)定體系。用傅立葉紅外光譜儀(FTIR)表征了復(fù)合納米粒子的結(jié)構(gòu)，掃描式電子顯微鏡(SEM)、投射電子顯微鏡(TEM)表征了復(fù)合納米粒子的尺寸與形貌，X射線衍射(XRD)、振蕩樣品磁強(qiáng)計(jì)(VSM)分別表征了復(fù)合納米粒子的晶型結(jié)構(gòu)與

3、超順磁性。并研究了表面改性與聚合物層的組成對(duì)Fe3O4在水體系中的分散穩(wěn)定性的影響，動(dòng)態(tài)光散射(DLS)表征了復(fù)合粒子的水力半徑，表明粒子的水力半徑隨體系PH值的變化而變化。
　　 結(jié)果：用殼聚糖及聚丙烯酸表面修飾可以成功地獲得Fe3O4納米粒子的中性(PH=7.4)水懸浮分散膠體。CS-g-PAA包裹后的Fe3O4粒子直徑在15.0-60.0nm之間呈現(xiàn)穩(wěn)定的單體分散狀態(tài)，單個(gè)粒子呈現(xiàn)球形或橢圓形，納米粒子的粒徑分布均勻，并且

4、其晶體結(jié)構(gòu)沒有改變，具有穩(wěn)定的超順磁性。
　　 結(jié)論：通過CS-g-PAA表面改性的Fe3O4納米粒子，在中性環(huán)境下具備水分散穩(wěn)定性能。CS-g-PAA/Fe3O4粒子粒徑分布在15.0-60.0nm之間，具有與Fe3O4類似的尖晶石結(jié)構(gòu)，超順磁性稍有降低，但仍可以滿足磁共振對(duì)比劑的要求。
　　 第二部分：殼聚糖-g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe3O4磁共振體外信號(hào)檢測(cè)
　　 目的：研究磁共振檢測(cè)殼聚糖-

5、g-聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe3O4(PH=7.4)的穩(wěn)定性及其在不同濃度下體外磁共振信號(hào)的變化規(guī)律。
　　 方法：將CS-g-PAA/Fe3O4磷酸鹽溶液按濃度梯度排列，MRI檢測(cè)其穩(wěn)定性及其信號(hào)變化；所用MRI序列為：FSE T1WI、 FRFSE T2WI及FIESTA T2*WI。
　　 結(jié)果：CS-g-PAA/Fe3O4在PH=7.4時(shí)MRI各序列信號(hào)均勻(P＞0.05)；CS-g-PAA/Fe3O4

6、在T1WI上信號(hào)強(qiáng)度隨鐵質(zhì)量濃度的增加先升高后降低，在T2WI及T2*WI上隨質(zhì)量濃度的增加信號(hào)降低；濃度越低，T1WI及T2*WI較T2WI越敏感，以T2*WI最敏感(P＜0.05)；在濃度≤20mg/L時(shí)，各序列上信號(hào)變化均較明顯。
　　 結(jié)論：臨床應(yīng)用型1.5T MRI可檢測(cè)CS-g-PAA/Fe3O4的穩(wěn)定性；在濃度≤20mg/L時(shí)MRI信號(hào)改變明顯；最敏感MR檢測(cè)序列為T2*WI。
　　 第三部分：殼聚糖-g-

7、聚丙烯酸(CS-g-PAA)納米Fe3O4磁共振成像評(píng)估大鼠非酒精性脂肪肝炎枯否細(xì)胞功能的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：初步探討CS-g-PAA/Fe3O4作為MRI對(duì)比劑評(píng)估大鼠非酒精性脂肪肝炎(NASH)枯否細(xì)胞(KC)功能的可行性。
　　 方法：20只雄性SD大鼠按完全隨機(jī)法分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組10只，實(shí)驗(yàn)組喂養(yǎng)高脂飼料，對(duì)照組喂養(yǎng)普通飼料。8周后對(duì)所有大鼠行肝臟MRI及CS-g-PAA/Fe3O4增強(qiáng)掃描，計(jì)算肝臟組

8、織平均信號(hào)強(qiáng)度下降百分比(PSIL)和CS-g-PAA/Fe3O4增強(qiáng)前后肝脾對(duì)比信號(hào)強(qiáng)度比值(RSIR)，測(cè)定血清總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)值，并取肝臟標(biāo)本行HE染色和普魯士藍(lán)染色分析病理表現(xiàn)。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組1只大鼠因麻醉過深死亡，其余9只血清TC及TG值分別為(6.58±1.25)mmol/L和(1.53±0.23)mmol/L，較對(duì)照組[(1.64±0.22)mmol/L和(0.55±0.14)mmol/L]

9、均明顯升高(t值分別為11.716和11.558，P值均＜0.01)。CS-g-PAA/Fe3O4增強(qiáng)掃描后兩組肝實(shí)質(zhì)信號(hào)強(qiáng)度在各序列明顯下降，在PDWI及T1WI上實(shí)驗(yàn)組下降程度分別為(34.78±4.51)％和(60.38±3.49％)，較對(duì)照組[分別為(64.96±2.42)％和(81.08±1.66)％]小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為-18.415和-16.240，P值均＜0.01)。PDWI、T2WI、T2*WI和T1WI序

10、列實(shí)驗(yàn)組CS-g-PAA/Fe3O4增強(qiáng)前后肝脾RSIR分別為(1.002±0.141、5.000±0.516、20.004±1.490和2.601±0.077，較對(duì)照組(0.400±0.102、1.500±0.115、-0.3±0.058和0.503±0.105)大(t值分別為10.745、19.800、39.168和92.785，P值均＜0.01)；實(shí)驗(yàn)組肝臟組織中普魯士藍(lán)染色陽(yáng)性顆粒積分(2.33±0.50)分較對(duì)照組(4分)明顯