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1、核心結(jié)合因子(corebindingfactoral,Cbfa1)是成骨細(xì)胞分化的特異性轉(zhuǎn)錄因子,除在骨骼發(fā)育及骨的形成中起關(guān)鍵作用外,在牙胚發(fā)育中亦具有重要作用,是成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和牙源性細(xì)胞株所必須的轉(zhuǎn)錄因子。Cbfa1可以調(diào)控眾多基因的轉(zhuǎn)錄,包括在牙胚發(fā)育中起重要作用的骨唾蛋白(Bonesialoprotein,BSP)、骨橋素(Osteopontin,OPN)、骨鈣素(Osteocalcin,OC)、堿性磷酸酶(alkali
2、nephosphatase,ALP)等多種礦化相關(guān)蛋白。研究發(fā)現(xiàn)Cbfa1在牙胚發(fā)育的早期階段高表達(dá),參與牙冠的形成和成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化。但其在牙胚發(fā)育后期,尤其是牙周組織發(fā)育中的研究較少。本研究采用生后BALB/c小鼠牙齒發(fā)育實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,利用免疫組化技術(shù)對(duì)Cbfa1及礦化相關(guān)蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織中的表達(dá)進(jìn)行定位,為研究牙齒發(fā)育和牙周組織的再生提供相應(yīng)的理論依據(jù)。 目的 (1)建立出生后BALB/c小鼠牙齒發(fā)育動(dòng)物
3、模型。 (2)探討Cbfa1及礦化相關(guān)蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)及意義。 方法 隔天取出生后第1~27天的BALB/c小鼠,拉頸處死,分離并解剖含下頜第一磨牙區(qū)下頜骨,新鮮配制4%多聚甲醛固定過(guò)夜。自出生后第7天的標(biāo)本開(kāi)始用甲酸-甲酸鈉復(fù)合脫鈣液脫鈣,脫鈣時(shí)間1~28天不等。常規(guī)石蠟切片,蘇木素-伊紅染色,確定小鼠牙齒發(fā)育情況。另外用免疫組化SABC法檢測(cè)牙齒發(fā)育過(guò)程中Cbfa1的表達(dá)和免疫
4、組化二步法檢測(cè)礦化相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 (1)出生后小鼠牙齒發(fā)育:出生后第一天小鼠下頜第一磨牙牙胚處于鐘狀晚期;第5天時(shí)內(nèi)釉上皮和外釉上皮形成的上皮根鞘內(nèi)折,牙根開(kāi)始發(fā)育;第11天時(shí)根部的牙囊開(kāi)始分化為牙周組織,初步具有牙根形態(tài);第17天的牙根發(fā)育約一半,牙周膜成纖維細(xì)胞排列具有方向性;第27天時(shí)牙周組織排列方向性明顯,根尖區(qū)有大量的細(xì)胞性牙骨質(zhì),根尖孔縮窄,牙根的發(fā)育逐漸完成。 (2)Cbfa1在出生后小鼠牙
5、體牙周組織發(fā)育中的表達(dá):牙齒發(fā)育早期,Cbfa1僅在前期牙本質(zhì)和牙槽骨的骨基質(zhì)中表達(dá),隨著牙囊細(xì)胞的分化,Cbfa1開(kāi)始在牙周膜細(xì)胞,牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞、成釉細(xì)胞中陽(yáng)性表達(dá),根部的牙髓細(xì)胞和成牙本質(zhì)細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)于冠部,尤其以根尖區(qū)牙根延伸的部位為重。前期牙本質(zhì)和牙槽骨基質(zhì)中逐漸變?nèi)?。牙齒整個(gè)發(fā)育過(guò)程中,牙本質(zhì)一直為陰性表達(dá),牙骨質(zhì)中亦未見(jiàn)明顯陽(yáng)性表達(dá)。 (3)礦化相關(guān)蛋白在出生后小鼠牙體牙周組織發(fā)育中的表達(dá):OPN和BSP在早
6、期的前期牙本質(zhì)和牙槽骨中表達(dá),并逐漸變?nèi)?,隨后在牙骨質(zhì)和牙周膜細(xì)胞中表達(dá),且牙骨質(zhì)中始終為強(qiáng)陽(yáng)性,但OPN表達(dá)早于BSP。ALP和OC在牙乳頭細(xì)胞和隨后的牙髓細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙周膜細(xì)胞中表達(dá),但它們?cè)谘拦琴|(zhì)中不表達(dá)。這四種礦化相關(guān)蛋白在牙本質(zhì)中都不表達(dá),在牙槽骨中的表達(dá)都較弱,但是它們都在成釉細(xì)胞和牙周膜細(xì)胞中表達(dá)。 結(jié)論 (1)BALB/c小鼠下頜第一磨牙在出生后第5天牙周組織開(kāi)始發(fā)育,27天基本發(fā)育完成。
7、 (2)Cbfa1在牙體牙周組織發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)具有時(shí)空特異性。Cbfa1參與牙本質(zhì)的形成、礦化和成牙本質(zhì)細(xì)胞、牙髓細(xì)胞的發(fā)育及牙周組織的發(fā)育,這表明Cbfa1除在牙齒發(fā)育早期具有重要作用外,亦在牙齒發(fā)育后期對(duì)牙體牙周組織的發(fā)育起必不可少的階段特異性作用。 (3)OPN、BSP、OC和ALP這四種礦化相關(guān)蛋白在牙體牙周組織發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)具有時(shí)空特異性。OPN和BSP主要在牙骨質(zhì)和牙周膜中表達(dá),提示它們對(duì)牙骨質(zhì)的形成起重要作用。
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