Cbfa1全長cDNA的克隆及其對成纖維細胞軟骨相關基因表達的影響.pdf

1、具有runt結構域的Cbfal是骨發(fā)生和成骨細胞分化中非常關鍵的轉錄因子.最近研究發(fā)現(xiàn)Cbfal參與了肥大軟骨細胞的分化.為了更進一步了解Cbfal在軟骨發(fā)生中的作用,我們研究了Cbfal對成纖維細胞中軟骨相關基因表達的影響.首先,應用RT-PCR技術,直接從E13.5天胎鼠肢芽細胞中克隆出Cbfal/Runx2全長cDNA,并將其定向克隆到pcDNA3.1質粒載體中,經酶切鑒定和序列分析證實了克隆的正確性.將pcDNA3.1-Cbfa

2、l/Runx2轉染到新生小鼠皮膚成纖維細胞中,48小時后收集細胞并用RT-PCR檢測Cbfal/Runx2的表達情況,結果顯示Cbfa1/Runx2獲得表達;但在未轉染組和轉染pcDNA3.1質粒組中沒有檢測到Cbfa1/Runx2的表達.在構建出Cbfa1真核表達載體后,將其轉化到成纖維細胞中,48小時后比較轉染組和未轉染組Sox9、Sox5和Sox6的轉錄表達情況,72小時后比較轉染組和未轉染組中Ⅱ型膠原的表達.結果顯示Cbfa1/