造血干細(xì)胸采集、分離與凍存的研究.pdf

1、目的:研究外周血造血干細(xì)胞的采集、分離、凍存及干細(xì)胞活性的檢測.方法:我們用臍血干細(xì)胞作為研究對象.用封閉式動脈采血法采集10例臍血,經(jīng)Ficoll法分離,取白細(xì)胞層重懸于10ml RPMI 1640培養(yǎng)液中作為樣本,對樣本作單核細(xì)胞計數(shù)(MNC),胎盼蘭拒染試驗及流式細(xì)胞儀CD34+細(xì)胞計數(shù).將樣本分裝在18個冷凍管內(nèi),分成3組,分別用10﹪DMSO、自配的5﹪DMSO+6﹪HES+4﹪人體白蛋白及CP-1三種不同的冷凍保存液凍存于-

2、196℃的液氮和-180℃的低溫冰箱中,冷凍時間為1個月、3個月和6個月.對冷凍后的樣本進(jìn)行MNC計數(shù).胎盼蘭拒染試驗及流式細(xì)胞儀CD34+細(xì)胞計數(shù).取5例未冷凍的樣本稀釋成細(xì)胞數(shù)<10<'6>/ml,進(jìn)行流式細(xì)胞儀計數(shù).所得結(jié)果作統(tǒng)計學(xué)分析.結(jié)論:我們認(rèn)為自配的冷凍保存液效果良好,完全可以適應(yīng)我們的臨床應(yīng)用,且其對造血干細(xì)胞的保護(hù)作用可與國外產(chǎn)品媲美,回輸后的毒付作用小.短期造血干細(xì)胞的凍存可以在-80℃低溫冰箱內(nèi)進(jìn)行,對細(xì)胞活性影響