2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、細(xì)胞凍存的常規(guī)程序?yàn)椋?、配置含10%15%(常見為10%)的DMSO或甘油,含10%20%血清的凍存培養(yǎng)液;一般來講血清含量可以在10%90%之間調(diào)整,凍存液中加入血清一方面可以為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng),另一方面可以在細(xì)胞凍存過程中提供非滲透性保護(hù)物質(zhì),如蔗糖,白蛋白等從而更好地保護(hù)細(xì)胞。有人親測(cè)10%血清凍存細(xì)胞,結(jié)果證明是可以的,但高血清比例的凍存液更有助于提高細(xì)胞活力,此外嬌貴的細(xì)胞可以適當(dāng)提高凍存液中血清的比例以保證獲得更高的存活率及活

2、力。我們用的凍存液配方含10%的DMSO,40%的血清及50%的完全培養(yǎng)基,復(fù)蘇細(xì)胞后細(xì)胞狀態(tài)良好。,其他狀態(tài)的細(xì)胞也可凍存,但是復(fù)蘇時(shí)存活率會(huì)大大降低。3、用配好的凍存液重懸細(xì)胞,并調(diào)節(jié)細(xì)胞密度至5106ml1107,轉(zhuǎn)移至凍存管中;具體凍存密度因細(xì)胞不同而異,高密度或者低密度對(duì)細(xì)胞成活率都有一定的影響。此階段細(xì)胞最好放于冰上或4℃,盡量減少細(xì)胞的常溫代謝活動(dòng)。4、細(xì)胞凍存:常見的方法主要有兩大類,一類為傳統(tǒng)方法,另一類為程序降溫;4

3、.1、傳統(tǒng)方法:凍存管置于4℃10min→20℃30min→80℃1618小時(shí)(或過夜)→轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期儲(chǔ)存。細(xì)胞置于4℃及20℃的時(shí)間不必太長(zhǎng),且從4℃轉(zhuǎn)移至20℃時(shí),最好顛倒混勻下細(xì)胞,防止細(xì)胞大量沉降堆積至管底,影響細(xì)胞復(fù)蘇。4.2、程序降溫:將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至細(xì)胞漸凍盒后放于80℃冰箱過夜或置于漸凍儀中以12℃min的降溫速率將至100℃后,再將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期保存;此過程的核心就是:緩降。因此,有人在凍存管外面包裹一團(tuán)拳頭大小的棉

4、花,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至80℃冰箱過夜后,次日直接轉(zhuǎn)移到液氮,這種簡(jiǎn)易的做法也是可行的。還有將80℃冰箱過夜后,又增加了一步將細(xì)胞懸掛于液氮液面上一段時(shí)間,再轉(zhuǎn)移至液氮,這種做法也可以一定程度上提高細(xì)胞的存活率。細(xì)胞復(fù)蘇的常規(guī)程序?yàn)椋?、快速解凍,液氮中取出凍存細(xì)胞后,迅速放入37℃水浴中,輕輕搖動(dòng)細(xì)胞,待其全部融化;為使凍存管快速解凍,此過程中水浴溫度可以也調(diào)整至40℃,邊晃動(dòng)邊觀察,待凍存管中殘留有小塊冰時(shí),停止即可,此時(shí)凍存管中細(xì)胞仍維持

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