家蠶抗?jié)夂瞬《荆ㄖ袊?guó)鎮(zhèn)江株）分子標(biāo)記及相關(guān)基因研究.pdf

1、家蠶是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，也是鱗翅目的模式昆蟲。家蠶濃核病毒是蠶業(yè)生產(chǎn)上危害比較嚴(yán)重的一類病毒。目前為止在家蠶中共發(fā)現(xiàn)了3種濃核病毒，中國(guó)鎮(zhèn)江株與DNV-2型相似，但是在血清學(xué)上存在差異。家蠶對(duì)BmDNV-1型的抗性由隱性單基因nsd-1和顯性單基因Nid-1控制，它們之間相互獨(dú)立。而家蠶對(duì)BmDNV-Z型的抗性由位于15號(hào)染色體的另一個(gè)隱性基因nsd-z控制。本論文從DNA入手利用RAPD技術(shù)篩選與抗性基因連鎖的分子標(biāo)記，并轉(zhuǎn)換成SCAR

2、標(biāo)記，為分子標(biāo)記輔助育種育種奠定基礎(chǔ)。同時(shí)采用近等基因系結(jié)合熒光差異顯示技術(shù)研究了家蠶對(duì)濃核病毒的抗性相關(guān)基因，其主要研究結(jié)論如下： 1.在抗DNV的品種秋豐d、高感品種華八35及其近等基因系BC6中，通過(guò)495個(gè)RAPD隨機(jī)引物在各個(gè)品種的DNA混合樣本中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得了一個(gè)與家蠶抗DNV基因相關(guān)的分子標(biāo)記S366。對(duì)這個(gè)標(biāo)記進(jìn)行了克隆、測(cè)序，并且根據(jù)序列設(shè)計(jì)特異引物轉(zhuǎn)換成SCAR標(biāo)記。在多個(gè)敏感性和抗性品種中進(jìn)行驗(yàn)證，

3、證明此分子標(biāo)記真實(shí)可靠。通過(guò)生物信息學(xué)對(duì)測(cè)序片段進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)該片段序列與黃嘌呤脫氫酶基因有91％的同源性。黃嘌呤脫氫酶在先天性免疫系統(tǒng)中有很多細(xì)胞保護(hù)功能，暗示著黃嘌呤脫氫酶基因可能與家蠶抗DNV有某種聯(lián)系。 2.通過(guò)熒光差異顯示技術(shù)，在抗DNV的品種秋豐d、高感品種華八35及其近等基因系BC6中獲得了與抗性相關(guān)的20多個(gè)特異條帶。經(jīng)過(guò)熒光定量PCR驗(yàn)證確認(rèn)了一個(gè)與抗性相關(guān)的特異片段，5'-RACE獲得了一個(gè)1096bp的全長(zhǎng)

4、序列。生物信息學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)該基因是一個(gè)蛋白激酶C抑制因子基因(proteinkinaseCinhibitor，PKCI)，命名為BmPKCI，這是該基因首次在家蠶上被克隆出來(lái)。蛋白激酶C抑制因子能夠通過(guò)多種途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。由此，提出了BmPKCI在家蠶抗BmDNV-Z中可能的作用模式。 3.在差異顯示實(shí)驗(yàn)過(guò)程中獲得了一個(gè)與家蠶EST有高度同源性的差異片段，通過(guò)設(shè)計(jì)特異引物5'-RACE獲得了一個(gè)814bp的全長(zhǎng)序列，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)