維甲酸誘導(dǎo)小型豬牙周膜干細(xì)胞的體外成骨實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：分離、培養(yǎng)、鑒定小型豬牙周膜干細(xì)胞（Periodontal Ligament Stem Cells，PDLSCs），研究其生物學(xué)特性，觀察維甲酸（Retinoic Acid，RA）對(duì)小型豬PDLSCs成骨作用的影響，與傳統(tǒng)誘導(dǎo)劑地塞米松（Dexamethasone，DEX）成骨作用進(jìn)行對(duì)比，以期為臨床利用組織工程學(xué)原理修復(fù)牙周組織缺損及其他骨缺損提供新思路和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。
　　方法：采用組織塊法獲得小型豬PDLCs，有限

2、稀釋法純化小型豬PDLSCs，免疫熒光法檢測(cè)STRO-1、免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)波形蛋白、角蛋白鑒定小型豬PDLSCs。測(cè)定繪制小型豬PDLSCs增殖曲線，檢測(cè)小型豬PDLSCs克隆形成率。使用RA對(duì)第三代小型豬PDLSCs進(jìn)行成骨誘導(dǎo)，14天后行ALP染色，誘導(dǎo)21天后，茜素紅、Von kossa染色檢測(cè)礦化結(jié)節(jié)，免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)成骨相關(guān)標(biāo)記物OPN、ONC、ColI、ColⅢ的表達(dá)，RT-PCR檢測(cè)ALP、OPN、ONC、ColI基

3、因表達(dá)。使用DEX、RA誘導(dǎo)PDLSCs，14天后對(duì)比各組細(xì)胞ALP活性。Real-time PCR定量分析DEX、RA誘導(dǎo)PDLSCs第21天ALP、OPN、OCN、ColI基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：小型豬牙周膜干細(xì)胞STRO-1，波形蛋白陽(yáng)性表達(dá)，角蛋白陰性表達(dá)，克隆形成率為2.8％，RA誘導(dǎo)14天后，ALP染色陽(yáng)性，誘導(dǎo)21天后茜素紅、Von kossa染色陽(yáng)性，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)OPN、OCN、ColI陽(yáng)性表達(dá)，ColⅢ陰

4、性表達(dá)。ALP活性檢測(cè)顯示，小型豬 PDLSCs誘導(dǎo)至第14天 RA組 ALP活性高于 DEX組（P=0.000）。Real-time PCR分析成骨相關(guān)基因表達(dá)結(jié)果顯示，RA誘導(dǎo)組細(xì)胞較DEX組明顯上調(diào)ALP、OPN、OCN基因表達(dá)（P＜0.05）；ALP、OCN基因表達(dá)與RA濃度呈劑量依賴關(guān)系；DEX10nM組ColI基因表達(dá)高于RA組（P=0.043）。
　　結(jié)論：小型豬PDLSCs能夠被RA誘導(dǎo)向成骨樣細(xì)胞分化。RA誘導(dǎo)小