應(yīng)用嘌呤霉素腎炎模型研究足細(xì)胞損害與腎小球硬化進(jìn)展的過(guò)程.pdf

1、背景與目的:足細(xì)胞損害貫穿于腎小球疾病和腎小球硬化的始終,嘌呤霉素氨基核苷大鼠腎病模型(PAN模型)是典型的反映足細(xì)胞損傷的動(dòng)物模型,多年來(lái)用于足細(xì)胞損傷的腎小球疾病的研究。本研究應(yīng)用PAN模型,從臨床、病理及足細(xì)胞相關(guān)蛋白nephrin和WT-1在足細(xì)胞中的表達(dá)等方面研究疾病不同階段足細(xì)胞損害在腎小球硬化進(jìn)展過(guò)程中的意義。
　　方法:單次尾靜脈注射嘌呤霉素氨基核苷制作PAN模型,對(duì)照組注射等量生理鹽水。測(cè)定4周、14周及20周的

2、血壓、24小時(shí)尿蛋白定量、血酯及血肌酐等指標(biāo),并處死大鼠,取其腎臟,石蠟包埋,切片,PAS及免疫組化染色,高倍鏡下拍片。PAS染色測(cè)定腎小球面積及硬化指數(shù),免疫組化進(jìn)行nephrin及WT-1表達(dá)的染色,半定量分析測(cè)定nephrin的表達(dá),在顯微鏡高倍鏡下計(jì)數(shù)腎小球WT-1表達(dá)的足細(xì)胞核的數(shù)量,上述所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:1.臨床指標(biāo):PAN組的24小時(shí)尿蛋白定量在第8天達(dá)峰值,同時(shí)血漿蛋白明顯降低,血膽固醇和甘油三酯

3、明顯增高;24小時(shí)尿蛋白定量在第4周降至正常,然后又逐漸增高,在14周和20周時(shí)顯著高于對(duì)照組;PAN組收縮壓在4周、14周和20周均值分別是131.40mmHg,143.43mmHg,和133.56mmHg,均高于對(duì)照組;PAN組血清肌酐在4周時(shí)為50.54±3.66μmol/L,隨著時(shí)間增長(zhǎng),20周為70.62±4.83μmol/L明顯高于對(duì)照組。上述數(shù)據(jù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.形態(tài)學(xué)指標(biāo):PAN組的腎小球硬化指數(shù)(GSI)在4周、14

4、周和20周分別是6.21％,25.35%和30.49%,明顯高于對(duì)照組。PAN組在4周時(shí)腎小球面積與對(duì)照組比較沒(méi)有明顯差異(395.44±5.55μm2和381.31±4.94μm2,P>0.05)、14周時(shí)PAN組的腎小球面積大于對(duì)照組(均值為522.36±13.04μm2和469.20±8.16μm2,P<0.01)。但是在20周時(shí)PAN組腎小球面積小于對(duì)照組(438.59±12.11μm2和492.69±58.24μm2,P<0.

5、001),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。并且20周時(shí)腎小球硬化指數(shù)與腎小球面積之間的相關(guān)系數(shù)為-0.82,呈強(qiáng)負(fù)相關(guān)關(guān)系。3.nephrin的表達(dá):對(duì)照組免疫組化染色nephrin沿腎小球毛細(xì)血管襻呈較為均勻的黃褐色粗顆粒樣的線狀分布,而PAN組在4周時(shí)與對(duì)照組比較nephrin略有分布不均,部分區(qū)域染色減弱或消失(均值為8.23±0.875和10.23±1.256,P<0.001),14周時(shí)在有節(jié)段性硬化的區(qū)域nephrin無(wú)表達(dá)(均值為7.5

6、8±0.712和9.74±1.234,P<0.001),而在20周時(shí)硬化的區(qū)域基本無(wú)表達(dá)(均值為6.08±1.342和7.88±0.924,P<0.001),與對(duì)照組比較均有明顯減少。4.WT-1的表達(dá):4周時(shí)WT-1在足細(xì)胞核表達(dá),呈深棕黃色粗大顆粒,與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均值為10.11±1.557和10.14±2.022,P>0.05);14周時(shí)PAN組WT-1表達(dá)較對(duì)照組有所減少(均值為6.8±1.887和9.02±1.73

7、2,P<0.001);20周時(shí)與對(duì)照組比較PAN組WT-1明顯減少(均值為4.43±1.007和7.34±1.216,P<0.001),足細(xì)胞數(shù)量隨著時(shí)間的延長(zhǎng)依次遞減。
　　結(jié)論:1.成功建立PAN模型,早期典型腎病綜合征、逐漸發(fā)展為慢性腎臟病(CKD),腎小球硬化的過(guò)程;2.在PAN模型中,在20周時(shí)腎小球硬化指數(shù)和腎小球面積之間是負(fù)相關(guān)關(guān)系,腎小球硬化程度越重,腎小球面積越小;3.nephrin的表達(dá)在PAN模型(腎病綜合征