原因不明復(fù)發(fā)性自發(fā)性流產(chǎn)小鼠模型中NKT細(xì)胞失調(diào)研究.pdf

1、目的: 對(duì)比研究NKT細(xì)胞在正常妊娠組小鼠與原因不明復(fù)發(fā)性自發(fā)性流產(chǎn)模型小鼠子宮滋養(yǎng)層細(xì)胞中的數(shù)量，細(xì)胞因子分泌情況、成熟度以及滋養(yǎng)層淋巴細(xì)胞T-bet mRNA的表達(dá)水平。 方法: 將CBA/J雌性與BABL/C雄性各一只同籠飼養(yǎng)，建立正常妊娠模型，將CBA/J雌性與DBA/2J雄性各一只同籠飼養(yǎng)，建立原因不明復(fù)發(fā)性自發(fā)性流產(chǎn)模型，每日觀察小鼠陰道有無栓塞，在小鼠妊娠第9、11、13、15天，終止小鼠妊娠。并取

2、子宮滋養(yǎng)層，用200目鋼絲篩網(wǎng)，進(jìn)行研磨，獲得單個(gè)細(xì)胞懸液。裂解紅細(xì)胞，取1.5×106的細(xì)胞用CD3、α-Galcer，加載的CD1d四聚體、CD69抗體，流式細(xì)胞檢測。另取5×106的細(xì)胞接種于RPMI1640+15％FBS培養(yǎng)液中，兩天后收集培養(yǎng)液上清，與懸浮細(xì)胞并提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，進(jìn)行熒光定量PCR分析，檢測T-bet相對(duì)于HPRT的表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.正常妊娠組與原因不明自發(fā)性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組，

3、在妊娠過程中，CD3+T細(xì)胞數(shù)量無顯著性變化。且兩組間無顯著性差異。 2.正常妊娠組，在妊娠過程中，滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌IFN-γ的量逐漸下降，伴隨有NKT細(xì)胞數(shù)量、成熟型頻率逐漸下降。 3.原因不明自發(fā)性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組，在妊娠過程中，滋養(yǎng)層細(xì)胞分泌IFN-γ的量逐漸上升，伴隨有NKT細(xì)胞數(shù)量、成熟型頻率逐漸上升。 4.無論是正常妊娠組還是原因不明自發(fā)性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組，滋養(yǎng)層分泌IFN-γ的量都與NKT細(xì)胞成熟型頻率正相關(guān)

4、。 5.原因不明自發(fā)性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組與正常妊娠組相比，T-bet mRNA存在表達(dá)異常。T-bet mRNA的表達(dá)水平與NKT細(xì)胞成熟型頻率，滋養(yǎng)層分泌IFN-γ的量正相關(guān)。 結(jié)論: 1.妊娠過程中，NKT細(xì)胞可能是滋養(yǎng)層分泌細(xì)胞因子的主要細(xì)胞。 2.原因不明自發(fā)性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生，可能與NKT細(xì)胞失調(diào)相關(guān)。妊娠早期與NKT細(xì)胞成熟型頻率偏低，分泌IFN-γ不足有關(guān)；妊娠中后期則與NKT細(xì)胞成熟型頻率偏高，