不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的遺傳學(xué)研究.pdf

1、第一部分 MTOR基因與不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性研究
　　目的：不明原因復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）是一種多因素參與的復(fù)雜性疾病。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，MTOR）基因參與小鼠胚胎發(fā)育和調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞增殖。本研究將探討MTOR基因啟動子區(qū)的SNP（rs17027478）與URSA發(fā)病的相

2、關(guān)性。
　　材料與方法：收集306例 URSA患者和127例健康女性作病例對照研究。采用TaqMan SNP基因分型方法對rs17027478位點進(jìn)行基因分型及關(guān)聯(lián)分析，采用實時熒光定量RT-PCR方法和相對熒光素酶活性檢測實驗初步研究該變異的功能。
　　結(jié)果：基因關(guān)聯(lián)分析研究發(fā)現(xiàn)rs17027478位點在≥3次自然流產(chǎn)的患者和健康女性中，等位基因頻率和基因型分布的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但在總的URSA樣本（≥2

3、次自然流產(chǎn)）中差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。URSA患者外周血MTOR mRNA表達(dá)水平顯著低于健康女性（P<0.05）。熒光素酶報告基因分析結(jié)果表明rs17027478a變異顯著降低熒光素酶活性（P<0.05）。
　　結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)MTOR基因啟動子區(qū)rs17027478變異與流產(chǎn)次數(shù)≥3次的URSA相關(guān)，并證明此變異能影響MTOR基因的轉(zhuǎn)錄，因此，MTOR基因可作為URSA的候選基因，有助于從遺傳因素方面解釋該病的發(fā)病機(jī)

4、制。
　　第二部分不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)全基因組拷貝數(shù)變異分析
　　目的：人類基因組拷貝數(shù)變異（copy number variation，CNV）是人類基因組的亞顯微結(jié)構(gòu)變異，其蘊(yùn)涵著豐富的遺傳信息不僅作為遺傳多態(tài)性在人類基因組中廣泛分布，而且大片段的CNV能通過干擾基因活性和改變基因劑量來影響基因表達(dá)，與疾病呈因果關(guān)系。本研究將初步探討不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous a

5、bortion,URSA）患者全基因組CNV情況。
　　材料與方法：收集50例中國漢族URSA患者和50例健康女性作病例對照研究。采用高通量基因組芯片掃描技術(shù)對所有樣本進(jìn)行全基因組 CNV標(biāo)記分型，分析URSA患者的全基因組CNV的信息。
　　結(jié)果：本研究新發(fā)現(xiàn)了56個與 URSA發(fā)病相關(guān)的 CNV，大小在0.383kb-42526.528kb之間，除18個CNV未覆蓋基因，余38個CNV區(qū)域均覆蓋≥1個基因；CNV在X染色

6、體上的分布頻率最高，顯著高于各常染色體（P<0.05）；分子量最大的CNV為10 p12.1缺失，覆蓋200個基因；另CNV22 q11.23缺失覆蓋已知的URSA候選基因GSTT1。本研究還檢出雜合性丟失（loss of heterozygosity，LOH）區(qū)域19個，大小在3016.812kb-8855.177kb之間；LOH在X染色體上的分布頻率最高，顯著高于各常染色體（P<0.05）；有4個LOH區(qū)域位于X染色體上（Xq11.