不明原因早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與子宮內(nèi)膜容受的相關(guān)性及分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討不明原因早期復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(UERM)與子宮內(nèi)膜容受的相關(guān)性并探討相關(guān)分子機(jī)制。 方法：①應(yīng)用光學(xué)顯微鏡、掃描電鏡、透射電鏡觀察種植窗期子宮內(nèi)膜組織學(xué)形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)，并通過免疫組織化學(xué)分析種植因子LIF、Intergrinαvβ3、MUC-1、ER、PR表達(dá)，探討UERM與子宮內(nèi)膜容受的相關(guān)性。②根據(jù)第一部分所得到的結(jié)論：UERM婦女子宮內(nèi)膜表現(xiàn)為線粒體損傷及細(xì)胞凋亡率增加，結(jié)合文獻(xiàn)UERM患者子宮動(dòng)脈血供下降，通過培養(yǎng)子

2、宮內(nèi)膜容受性的理想模型細(xì)胞株(RL95-2)，采用化學(xué)性低氧培養(yǎng)方法，在培養(yǎng)液中添加不同濃度Cocl2(0umol/L、30umol/L、62.5umol/L、125umol/L、250umol/L)觀察量效反應(yīng)，并以明顯降低細(xì)胞活性的Cocl2濃度(62.5umol/L)培養(yǎng)細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)(0h、12h、24h、48h)，通過cck-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，JC-1染色測(cè)線粒體膜電位以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，驗(yàn)證缺氧是導(dǎo)致子宮內(nèi)膜上皮

3、細(xì)胞線粒體損傷、細(xì)胞凋亡的原因。并探討隨著缺氧程度增加子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞損傷及凋亡的趨勢(shì)。③通過PCR、Wester blot檢測(cè)凋亡相關(guān)因子HIF-1α、TWEAK及NF-kB在缺氧培養(yǎng)的RL95-2細(xì)胞的表達(dá)，并通過免疫組織化學(xué)分析UERM組和對(duì)照組子宮內(nèi)膜TWEAK、HIF-1α蛋白表達(dá)比較，探討慢性缺血缺氧導(dǎo)致子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的相關(guān)分子機(jī)制。 結(jié)果：⑴UERM患者子宮內(nèi)膜組織形態(tài)黃體期缺陷(LPD)的發(fā)生率高于正常婦女；同

4、時(shí)胞飲突的發(fā)育(形態(tài)及密度)明顯滯后于正常婦女；透射電鏡發(fā)現(xiàn)UERM婦女子宮內(nèi)膜線粒體損傷、細(xì)胞凋亡率明顯增加，上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞炎性細(xì)胞浸潤；種植因子LIF、MUC-1、PR表達(dá)異常下降，而IntergrinαVβ3、ER表達(dá)無明顯異常。⑵隨著缺氧程度及缺氧時(shí)間增加，RL95-2細(xì)胞增殖活性降低，線粒體損傷及細(xì)胞凋亡率呈逐漸增加趨勢(shì)。⑶UERM患者子宮內(nèi)膜TWEAK、HIF-1α表達(dá)明顯高于正常婦女，并且隨著缺氧時(shí)間增加，RL95-2

5、細(xì)胞株TWEAK、HIF-1αmRNA、蛋白表達(dá)呈逐漸增高的趨勢(shì)，NF-kB p65蛋白表達(dá)也逐漸增強(qiáng)。 結(jié)論：①UERM患者子宮內(nèi)膜發(fā)育滯后；內(nèi)膜上皮細(xì)胞線粒體損傷，細(xì)胞凋亡率增加；內(nèi)膜種植因子LIF、MUC-1、PR表達(dá)下降；子宮內(nèi)膜容受性調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)各標(biāo)志物表達(dá)異常。②62.5umol/L Cocl2培養(yǎng)液培養(yǎng)6小時(shí)可以模擬RL95-2細(xì)胞缺氧模型；隨著化學(xué)性缺氧程度加重，RL95-2細(xì)胞增殖活性下降，細(xì)胞凋亡率增加。隨著化學(xué)