二化螟觸角感受器類型及其GOBP2基因保守區(qū)的克隆與序列分析.pdf

1、以往研究表明,昆蟲觸角氣味結(jié)合蛋白在昆蟲感知外界信息物質(zhì)中起作用;并且明確這種蛋白廣泛地分布在觸角感受器中.為了對二化螟觸角氣味結(jié)合蛋白進(jìn)行電生理及行為學(xué)方面的研究,我們有必要首先清楚認(rèn)識(shí)二化螟觸角感受器以及得到足夠的氣味結(jié)合蛋白.該文就此展開了研究,對二化螟觸角感受器做了深入觀察,同時(shí)通過分子生物學(xué)手段克隆了GOBP2基因.迄今為止(以GenBank/EMBL中登記為準(zhǔn)),該文是國內(nèi)外首次開展的鱗翅目螟蛾科昆蟲觸角氣味結(jié)合蛋白的分子生

2、物學(xué)研究.具體結(jié)果包括以下兩個(gè)部分:1.運(yùn)用光學(xué)顯微鏡和掃描電子顯微鏡對二化螟蛾Chilo suppressalis(Walker)觸角感受器的外部形態(tài)、分布及其相關(guān)數(shù)量作了觀察和統(tǒng)計(jì).由于鞭節(jié)要比雌蟲的略長,因此雄蟲觸角要長一些,但是二者的鞭節(jié)數(shù)目大致相同.2.比較已報(bào)道11種昆蟲的GOBP2基因保守序列,設(shè)計(jì)了一對簡并引物,運(yùn)用PCR技術(shù),以二化螟Chilo suppressalis(Walker)觸角cDNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增,獲得了

3、一條450bp左右的特異性條帶.將以上片段克隆到T-easy載體上,獲得重組子pGEM-C-GOBP2.序列測定和結(jié)構(gòu)分析結(jié)果表明,二化螟GOBP2保守區(qū)編碼序列全長416bp,編碼138個(gè)氨基酸殘基.另外,序列中有6個(gè)保守的半胱氨酸位點(diǎn),具有氣味結(jié)合蛋白的典型特征.同時(shí)以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到了一條1.8kb左右的特異性條帶,同樣克隆到T-easy載體上得到pGEM-G-GOBP2重組子,進(jìn)行測序.結(jié)果表明,該序列長1