羊梭菌病三聯(lián)四防苗厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基的研制與應(yīng)用.pdf

1、　　本研究根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求和厭氧菌自身的生長(zhǎng)代謝理論，采用對(duì)比、優(yōu)化試驗(yàn)方法，對(duì)羊梭菌病三聯(lián)四防苗生產(chǎn)使用的產(chǎn)氣莢膜梭菌B型、D型和腐敗梭菌三種厭養(yǎng)菌進(jìn)行了培養(yǎng)基的研究與應(yīng)用試驗(yàn)。通過(guò)對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌B、D型和腐敗梭菌的多次培養(yǎng)試驗(yàn)，研制成功了新的厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅰ和Ⅱ。厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅱ可以作為上述三種細(xì)菌的通用培養(yǎng)基。厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅰ與厭氧產(chǎn)毒培養(yǎng)基Ⅱ相比，培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌D型效果相同，培養(yǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌B型和腐敗梭菌效果略差，成

2、本略低。因此生產(chǎn)中可以分別配制上述培養(yǎng)基使用?！　‘a(chǎn)氣莢膜梭菌(B型、D型)和腐敗梭菌在研制的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長(zhǎng)情況良好，產(chǎn)毒能力強(qiáng)，可達(dá)到《中華人民共和國(guó)獸用生物制品規(guī)程》(2000年版)規(guī)定的產(chǎn)毒高標(biāo)準(zhǔn)。配制疫苗的免疫原性達(dá)到了《規(guī)程》規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，疫苗成品檢驗(yàn)全部合格。同時(shí)，測(cè)定了產(chǎn)氣莢膜梭菌B型、D型和腐敗梭菌在這種新研制的培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線(xiàn)和產(chǎn)毒特性，從而掌握了這些細(xì)菌在新研制培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)產(chǎn)毒規(guī)律。結(jié)果表明，產(chǎn)氣莢膜梭菌

3、B型經(jīng)2h的適應(yīng)期后，很快進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)到8h細(xì)菌密度接近最高值，OD630為4.329；經(jīng)檢測(cè)，培養(yǎng)4-24h的細(xì)菌所產(chǎn)生的毒素(培養(yǎng)物上清)0.001-0.002ml2/2致死KM小鼠。產(chǎn)氣莢膜梭菌D型的生長(zhǎng)速度也較快，無(wú)適應(yīng)期就直接進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)到12h時(shí)細(xì)菌密度最高，OD630為1.75；細(xì)菌最佳產(chǎn)毒期在6-14h，培養(yǎng)物上清0.0005-0.00065ml2/2致死KM小鼠。腐敗梭菌生長(zhǎng)速度較慢，經(jīng)6h的適應(yīng)期后，

4、才能進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)到14h時(shí)細(xì)菌密度最高，OD630為1.335；細(xì)菌毒力在培養(yǎng)后的6-24h內(nèi)0.01ml菌液可達(dá)到在24h內(nèi)2/2致死KM小鼠的效果。通過(guò)生產(chǎn)曲線(xiàn)的測(cè)定和產(chǎn)毒規(guī)律的探索，指導(dǎo)疫苗的生產(chǎn)培養(yǎng)周期。各細(xì)菌生產(chǎn)疫苗過(guò)程中的培養(yǎng)時(shí)間與《規(guī)程》規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間相比，可縮短2-10h不等?！　≡撗兄频呐囵B(yǎng)基，配制方法簡(jiǎn)單，質(zhì)量穩(wěn)定，可重復(fù)性好，達(dá)到較高的細(xì)菌密度和產(chǎn)毒效果。節(jié)約人力和時(shí)間，所有需要的配制用試劑均可以成品方式