那西肽產(chǎn)生菌s.actuosus的育種及發(fā)酵條件的優(yōu)化

1、復旦大學藥學那西膚產(chǎn)生菌Sactuosus的育種及發(fā)醉條件的優(yōu)化中文摘要本研究對那西膚產(chǎn)生菌Sactuosus進行誘變、原生質(zhì)體再生和Genomeshuffling篩選高活力菌種，同時對代謝工程方面進行研究和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果顯示通過紫外線及亞硝基孤聯(lián)合誘變獲得高產(chǎn)菌株ZZ，該菌株進行3次傳代試驗顯示比較穩(wěn)定。然后對高產(chǎn)菌株Zz發(fā)酵條件進行優(yōu)化，在原培養(yǎng)基中添加2%黃豆餅粉、2%淀粉、0.1%硫酸鈉及0.01%硫酸銅可以提高發(fā)酵單位，另

2、外對補料條件、接種時間等發(fā)酵條件進行改變，結(jié)果顯示種齡采用30小時、初始pH值為7.0、補料采用60%的葡萄糖較適合菌種Z:的發(fā)酵，菌種Zz相對于出發(fā)菌種Z。那西膚提高產(chǎn)量達26.3%02003年提交給杭州匯能生物技術(shù)公司生產(chǎn)，中試生產(chǎn)發(fā)酵單位最高達2300pg毗，產(chǎn)品占領(lǐng)全國市場。通過原生質(zhì)體再生獲得的菌種Z?；盍^高，活力最高達到1600pg加L，并且測定其生化曲線，說明采用原生質(zhì)體再生方法是選育高產(chǎn)菌種的一條較好的途徑。但菌種Z傳

3、至第3代不穩(wěn)定，應此菌種穩(wěn)定的工作必須進行。本研究也嘗試用genomeshuffling方法選育高發(fā)酵單位菌種，但結(jié)果不理想，可能與篩選菌株及時間較少有關(guān)。本研究同時對星點設(shè)計在發(fā)酵上的應用進行初步探索，星點設(shè)計可以通過三維圖或者等高線迅速預測發(fā)酵影響因素和發(fā)酵單位的數(shù)值。本研究結(jié)果顯示:那西膚發(fā)酵單位與硫酸鈉、硫酸按和氯化鈉之間關(guān)系可以用一個明確的二項方程式計算，相關(guān)系數(shù)達到0.8960產(chǎn)物通過有機溶劑提取，用HPLC鑒定，再用核磁共