12780.pus186cotcta18重組枯草芽孢工程菌免疫應(yīng)答特征分析研究

1、貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2014屆碩士研究生論文《中國(guó)圖書資料分類法》分類號(hào):R384單位代碼:10660學(xué)號(hào):TS100152貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2014屆碩士研究生學(xué)位論文貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2014屆碩士研究生學(xué)位論文Pus186CotCTa18重組枯草芽孢工程菌免疫應(yīng)答特征分析研究研究生：沈晨導(dǎo)師：黃江教授年級(jí)：2010級(jí)專業(yè)：病原生物學(xué)2014年4月15日貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2014屆碩士研究生論文Pus186CotCTa18重組枯草芽孢工程菌免疫應(yīng)答特征分析研究Pus

2、186CotCTa18重組枯草芽孢工程菌免疫應(yīng)答特征分析研究專業(yè)：病原生物學(xué)研究生：沈晨導(dǎo)師：黃江教授【摘要】目的【摘要】目的分析課題組已構(gòu)建成功的亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴Ta18抗原重組枯草芽孢工程菌（Pus186CotCTa18）的免疫應(yīng)答特征，為闡明亞洲帶絳蟲(chóng)六鉤蚴Ta18抗原生物學(xué)功能和免疫保護(hù)的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法方法使用DSM(DifcoSpulationMedium)培養(yǎng)基誘導(dǎo)Pus186CotCTa18重組枯草芽孢工程芽孢生成

3、，收集芽孢，用1MNaCl洗滌芽孢，加PMSF至終濃度1μmolL，將芽孢溶于一定量蒸餾水中，68C1h殺滅殘留的枯草桿菌繁殖體。芽孢于20C保存?zhèn)溆茫惶崛⊙挎咄鈿さ鞍?，使用Ta18抗血清，蛋白印跡驗(yàn)證外源蛋白在重組芽孢表面的表達(dá)；使用Ta18抗原重組枯草芽孢口服及腹腔注射免疫大鼠：①腹腔注射免疫：30只SD大鼠，隨機(jī)分為3組，分別為對(duì)照組（naive），Pus186CotC芽孢組（cotc）和Pus186CotCTa18表達(dá)芽孢組（c

4、otcta18），每組10只擬分別腹腔注射生理鹽水、11010pus186CotC芽孢和pus186CotCTa18表達(dá)株芽孢。30只大鼠均取尾血后，分離血清，標(biāo)記并分裝凍存，每組予以第1次腹腔注射。間隔兩周免疫一次，共3次，分別于第1、15、32、50天，各組取尾血，分離血清，標(biāo)記并分裝凍存；②口服免疫：選3組SD大鼠，每組10只。分別為對(duì)照組，芽孢組，表達(dá)株芽孢組。對(duì)照組（naive），Pus186CotC芽孢組（cotc）和Pus

5、186CotCTa18表達(dá)芽孢組（cotcta18）分別進(jìn)行口服灌胃生理鹽水，11010pus186CotC芽孢和pus186CotCTa18表達(dá)株芽孢，在第0、1、2、16、17、18、33、34、35天用灌胃針經(jīng)口免疫各組大鼠，分別在第1、15、32、50天采集血清樣本，用于ELISA檢測(cè)。設(shè)Pus186CotCTa18芽孢組、Pus186CotC芽孢組及常規(guī)感染組，口服免疫家豬，定期收集血清和糞便，ELISA法檢測(cè)血清中IgG及糞