2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究已構建成功的亞洲帶絳蟲六鉤蚴Ta18抗原重組枯草芽孢的生物學活性。初步探索家豬口服Ta18抗原重組枯草芽孢的免疫保護效果。為研究新型高效抗絳、囊蟲病疫苗提供實驗基礎。
  方法:Ta18抗原重組枯草芽孢生物學活性研究:使用DSM(Difco Sporulation Medium)培養(yǎng)基,采用“耗竭法”誘導芽孢生成,收集芽孢;提取芽孢外殼蛋白,使用 Ta18抗血清,通過蛋白印跡(Western Blotting)、免疫熒光

2、、流式細胞儀驗證外源蛋白在重組芽孢表面的表達;模擬胃、腸道環(huán)境,進行枯草芽孢耐胃、腸道環(huán)境的抗性評估。對亞洲帶絳蟲進行形態(tài)和分子鑒定。對Ta18抗原重組枯草芽孢免疫保護效果進行評估:分離亞洲帶絳蟲蟲卵,體外孵化六鉤蚴,分3組進行體外殺傷六鉤蚴實驗,進行統(tǒng)計學分析;設三組即重組枯草芽孢組(用Pus186-CotC-Ta18免疫)、空載體枯草芽孢組(用Pus186-CotC免疫)和常規(guī)感染組(用生理鹽水處理),口服免疫家豬,定期收集血清和糞

3、便,ELISA法檢測血清中IgG及糞便中IgA的含量變化;免疫家豬后,用亞洲帶絳蟲蟲卵攻擊感染家豬,于感染后第30、40天,分批處死家豬,仔細檢查家豬體內(nèi)囊尾蚴寄生情況,計數(shù)蟲荷;取感染家豬肝臟組織做病理切片,伊紅-蘇木素(HE)染色,觀察肝臟病變情況。
  結果:Ta18抗原重組枯草芽孢生物學活性研究:DSM培養(yǎng)基培養(yǎng)36h誘導芽孢生成;提取芽孢外殼蛋白行15%SDS-PAGE,結果表明目的蛋白在芽孢表面高效表達,芽孢外殼蛋白能

4、被重組蛋白Ta18免疫的SD大鼠血清識別;使用重組蛋白特異性抗血清,免疫熒光能檢測到芽孢表面 Ta18的表達;流式細胞儀能檢測到重組芽孢有特異強熒光光峰;枯草芽孢在模擬胃、腸道環(huán)境中活力不受影響。亞洲帶絳蟲鑒定:經(jīng)鑒定采集的蟲種均為亞洲帶絳蟲。Ta18抗原重組枯草芽孢免疫保護效果研究:抗Tal8多抗血清對六鉤蚴具有明顯的殺傷作用;家豬糞便Ta18特異性IgA水平顯著高于非重組芽孢免疫組(p<0.05)。血清Ta18特異性IgG水平與非重

5、組芽孢免疫組相比差異性不顯著(p>0.05);免疫的家豬用蟲卵攻擊感染后,分別在第30,40天處死家豬,只在肝臟發(fā)現(xiàn)有囊尾蚴的寄生,而其他臟器和肌肉中都未檢出囊尾蚴;統(tǒng)計囊尾蚴在家豬肝臟中的寄生數(shù)量,囊蟲數(shù)顯著減低,減蟲率達75.4%;感染家豬肝臟病理切片顯示部分肝細胞水腫,組織內(nèi)較多嗜酸性粒細胞聚集,并出現(xiàn)嗜酸性變,囊尾蚴周圍有大量炎性細胞包繞。
  結論:Ta18在重組枯草芽孢表面具有較好的穩(wěn)定性,可大量誘導表達,重組芽孢能耐

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