豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴TSOL18重組基因工程疫苗的研制.pdf

1、本研究從孵化并激活的豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴中提取總RNA，利用RT-PCR技術(shù)在國(guó)內(nèi)首次克隆了豬帶絳蟲(chóng)六鉤蚴疫苗侯選基因TSOL18基因。選用近年來(lái)發(fā)展最快和最具潛能的真核表達(dá)系統(tǒng)-畢赤酵母，構(gòu)建了重組表達(dá)載體pPIC9K-TSOL18，電轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌種GS115，并用G418抗性梯度篩選法，獲得多拷貝重組菌株。對(duì)重組菌株用甲醇進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE和Western-blot分析結(jié)果表明，誘導(dǎo)表達(dá)的培養(yǎng)上清中表達(dá)出大小為12ku和16

2、ku具有反應(yīng)活性的重組蛋白?！　≡谪i帶絳蟲(chóng)疫苗研究中，首次應(yīng)用具有天然蛋白特性的真核表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)。將TSOL18重組抗原與206佐劑結(jié)合，制成豬囊蟲(chóng)基因工程疫苗，對(duì)豬作了兩批免疫試驗(yàn)?！　∮胮cDNA3.1/IFN-γ重組質(zhì)粒作為豬囊蟲(chóng)重組抗原免疫增強(qiáng)劑，抗體檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯升高，但免疫豬后淋巴細(xì)胞增殖非常明顯，并明顯增強(qiáng)了疫苗的保護(hù)效果，該組免疫豬減蟲(chóng)率高達(dá)91％，與粗制抗原免疫組相同。而用pcDNA3.1/IL-4和