13140.遲鈍愛德華氏菌esrb突變體對(duì)t3ss和t6ss的差異性調(diào)控

1、UDC：華東理工大學(xué)學(xué)位論文遲鈍愛德華氏菌EsrB突變體對(duì)T3SS和T6SS的差異性調(diào)控楊衛(wèi)錚指導(dǎo)教師姓名：張?jiān)d(教授)王啟要(副教授)華東理工大學(xué)，上海市梅隴路130號(hào)，200237申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)名稱：生物化工論文定稿日期：2013430論文答辯日期：2013531學(xué)位授予單位：學(xué)位授予日期：華東理工大學(xué)r2013牟6R21日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：莊炙萍廁硫炙關(guān)妞修鄹獨(dú)投隙渡漪競最華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文第1頁遲鈍愛德華氏

2、菌EsrB突變體對(duì)T3SS和T6SS的差異性調(diào)控摘要遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiellatarda)是一種對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)極具危害的致病菌，其致病過程是一系列致病基因時(shí)空順序表達(dá)的結(jié)果。EsrAEsrB雙組分系統(tǒng)對(duì)該菌的毒力機(jī)制具有中樞性的調(diào)節(jié)作用，其中EsrB是響應(yīng)調(diào)控元件，主要通過對(duì)III型分泌系統(tǒng)(T3SS)和VI型分泌系統(tǒng)(T6SS)以及溶血素EthA的調(diào)控作用來實(shí)現(xiàn)對(duì)宿主的入侵和致病過程。研究野生型和各種突變型EsrB對(duì)這些毒

3、力因子的差異性調(diào)控，將有助于更深入地理解遲鈍愛德華氏菌的致病機(jī)制和毒力調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，為研發(fā)高侵染性、低毒力的新型疫苗打下基礎(chǔ)。本文通過易錯(cuò)PCR對(duì)esrB基因進(jìn)行隨機(jī)突變，得到了突變位點(diǎn)具有隨機(jī)性和分散性特點(diǎn)的esrB突變體。將這些突變基因?qū)階esrB中獲得了一系列esrB基因替代菌株。本文結(jié)合溶血活性檢測以及ELISA實(shí)驗(yàn)對(duì)T3SS和T6SS分泌蛋白的檢測結(jié)果，最終篩選出兩株侵染能力增強(qiáng)、毒力蛋白分泌能力減弱的菌株，即15號(hào)和47號(hào)，并

4、通過測序確定了突變位點(diǎn)。同時(shí)構(gòu)建了T6SS的無標(biāo)記框內(nèi)缺失突變株AT6SS，并在實(shí)驗(yàn)室已有的AT3SS基礎(chǔ)上篩選獲得了△T3SS／△T6SS。本文進(jìn)一步對(duì)野生株EIB202、AesrB以及上述菌株進(jìn)行了包括致病能力、感染動(dòng)力學(xué)、胞外蛋白譜、部分致病基因的轉(zhuǎn)錄水平、巨噬細(xì)胞內(nèi)存活復(fù)制能力等在內(nèi)的多項(xiàng)表型檢測，發(fā)現(xiàn)T3SS和T6SS在遲鈍愛德華氏菌致病過程中都發(fā)揮了重要的作用，但T3SS的貢獻(xiàn)要大于T6SS。AesrB與AT3SS／AT6S