16550.斑馬魚(yú)lamina基因編碼序列的克隆與laminaegfppcs2重組質(zhì)粒的構(gòu)建

1、《中國(guó)圖書(shū)資料分類(lèi)法》分類(lèi)號(hào)：R394.3單位代碼：10660學(xué)號(hào)：S100149貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2013屆臨床醫(yī)學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位材料臨床醫(yī)學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位材料(臨床論文部分臨床論文部分)斑馬魚(yú)斑馬魚(yú)LaminA基因編碼序列基因編碼序列的克隆與的克隆與LaminAEGFPpCS2重組質(zhì)粒的構(gòu)建重組質(zhì)粒的構(gòu)建研究生：葉芝旭導(dǎo)師：何志旭年級(jí)：2010級(jí)專(zhuān)業(yè)：兒科學(xué)2013年5月10日貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2013屆碩士研究生論文1斑馬魚(yú)LaminA基因

2、編碼序列的克隆與LaminAEGFPpCS2重組質(zhì)粒的構(gòu)建專(zhuān)業(yè)：兒科學(xué)研究生：葉芝旭導(dǎo)師：何志旭摘要摘要目的目的克隆斑馬魚(yú)LaminA的基因編碼序列，并構(gòu)建LaminAEGFPpCS2的重組質(zhì)粒，用SP6酶制備正義的mRNA。方法方法收集多個(gè)時(shí)相的野生型斑馬魚(yú)胚胎，TRIZOL法提取總RNA，RTPCR法擴(kuò)增LaminA基因編碼序列，將得到的LaminA與EGFPpCS2分別用BamHI、EcI酶雙酶切后將LaminA插入EGFPpCS

3、2質(zhì)粒中。對(duì)重組質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切、菌落PCR及插入片段進(jìn)行測(cè)序鑒定后，用NotI酶線性化質(zhì)粒，通過(guò)SP6酶體外轉(zhuǎn)錄合成了融合了EGFP的LaminAmRNA。結(jié)果結(jié)果通過(guò)RTPCR技術(shù)擴(kuò)增出1977bp的LaminA擴(kuò)增產(chǎn)物，構(gòu)建的LaminAEGFPpCS2重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切、菌落PCR及插入片段的測(cè)序后與預(yù)期結(jié)果相符，用SP6酶體外轉(zhuǎn)錄獲得的5‘端加帽的正義mRNA，通過(guò)胚胎顯微注射，觀察到綠色熒光蛋白的表達(dá)。結(jié)論結(jié)論克隆了斑馬魚(yú)Lam