17673.杜氏鹽藻s腺苷同型半胱氨酸水解酶相互作用蛋白的篩選與鑒定_第1頁
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文檔簡介

1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterScreeningand‘dentificatiqofproteimthat：ScreenmgandidentiticationoforoteinsinteractwithSadenosylhomocystinehydrolasefromDunaliellasalinaByDandanChaiSupervisor：ProfL

2、exunXueCellBiologyDepartmentofBioengineering一一May2012摘要杜氏鹽藻S一腺苷同型半胱氨酸水解酶相互作用蛋白的篩選及鑒定摘要背景及目的S一腺苷同型半胱氨酸水解酶(Sadenosylhomocystinehydrolase，SAHH)是甲基化通路中一個關鍵的限速酶，可逆催化s腺苷同型半胱氨酸(Sadcnosylhomocystine，SAH)水解生成腺苷和同型半胱氨酸，SAH是所有依賴S腺苷

3、甲硫氨酸(Sadenosylmethionine，SAM)轉甲基酶的反應產物，作為產物抑制劑SAH水平的增加可以抑制依賴SAM轉甲基酶作用，因此SAHH快速分解SAH成為甲基化進行的先決條件。SAHH不但作為生物轉甲基化反應的調節(jié)者，而且在作為抗寄生蟲藥物靶點以及治療腫瘤、艾滋病等重大疾病都有深入的研究。為了研究杜氏鹽藻SAHH的細胞內在分子作用機制，本實驗構建S一腺苷同型半胱氨酸水解酶的酵母雙雜交誘餌表達載體pGBKT7SAHH，通過

4、酵母雙雜交技術篩選杜氏鹽藻細胞cDNA文庫與杜氏鹽藻SAHH相互作用的蛋白，并通過體外實驗FarWesternblotting、Hispulldown和體內實驗免疫共沉淀來驗證酵母雙雜交的陽性結果。方法1SAHH相互作用蛋白的篩選用PCR方法擴增杜氏鹽藻SAHH的開放閱讀框，酶切鑒定以及測序正確后，將其與酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7連接，構建誘餌表達載體pGBKT7SAHH。用PEG／LiAc法將誘餌載體轉入AHl09和Y187酵母細

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