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1、學陵代碼:1(1271J丹類q:IJ礙學弓:I挫∽I)H㈦IIlllllllllllllL[1llllllllllllLLlllllllllLLllIY3258617上磣腳范大墨碩士學位論文mTERF蛋白pTACl5調(diào)控擬南芥葉綠體基因的轉(zhuǎn)錄終止學專院:生僉當巫境科堂莖院業(yè):生物化堂皇分王生物雯研究方向;功能基因組堂研究生姓名:熊漁渡指導教師:揚地畝熬授完成日勰:2Q12生5目蘭!!竺曼皇壘!整旦竺皇!型旦盟曼堅!墮堅璺!!!!旦!!坐
2、!旦!竺旦!!壘!!塑垡AbstractPlastid—encodedpolymerase(PEP)isthemainpolymeraseinchloroplasts,responsibleforthetranscriptionofmostchloroplastgenesPEPiscomposedofthecoresubunitencodedbythechloroplastandtheperipheralproteinencodedby
3、thenucleusPTAC15/mTERF8isamemberofthePEPcomplex(alsoknownasTACcomplex)Inthiswork,thefunctionofpTACl5inchloroplastgeneexpressionwasinvestigatedSequenceanalysisshowedthatpTAC15belongstothememberofmTERFfamilycontainingeight
4、conservedmTERFdomainTransientexpressionanalysisintobaccoshowedthatpTAC15islocalizedinchloroplastImmunblottinganalysisusingthepTAC15:MYCtransgenicplantsshowedthatpTAC15associatedwithchloroplastthyakoidmembraneBNPAGE2Dandi
5、mmunblottinganalysisshowedthatpTAC15:MYCwaspresentinasupermolecularcomplexwithmolecularweight660kD,andCO—migratedwiththecoresubunit,rpoBYeasttWOhybridsshowedthatpTAC15waspresentinPEPcomplexandinteractedwithpTAC10Inordert
6、oanalyzetheroleofpTAC15intheprocessofchloroplastgeneexpression,mutantsofptacl5wereidentifiedQRTPCRanalysisshowedthattheexpressionofphotosynthesisgenesweresimilartOthewildtypeintheptacl5,exceptthatthetranscriptionofpsbJwa
7、supregulatedCircularizedRNARTPCRresultsshowedthatthetranscriptionofpsbJterminatedatthe94thand95thbpafterthestopcodoninthewildtype,whileitsterminationwasat94th,95thbpandmanyotherpositionsintheptacl5,whichsuggestedtheknock
8、outofthepTACl5affectstheterminationofpsbJatthecorrectsiteEMSAandcpCHIPresultsshowedthatpTAC15speciallybindstothe3’terminalofpsbJDNAFurtherinvitrobiochemicalanalysisshowedthatpTAC15proteinhastheeffectoftranscriptiontermin
9、ationTheseresultsofthisdissertationshowedthatpTACI5,asubunitofPEPcomplex,bindstothe3’terminalofchloroplastgenepsbJtoinvolveinitstranscriptionterminationKeyWords:chloroplasts;thylakoid;transcription;termination;PEPcomplex
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