21136.多粘類芽孢桿菌胞外多糖的發(fā)酵條件、結(jié)構(gòu)、化學(xué)修飾及其抗氧化活性的研究

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文多粘類芽孢桿菌胞外多糖的發(fā)酵條件、結(jié)構(gòu)、化學(xué)修飾及其抗氧化活性的研究姓名：劉俊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物工程指導(dǎo)教師：曾曉雄201006多粘類芽孢桿菌胞外多糖的發(fā)酵條件、結(jié)構(gòu)、化學(xué)修飾及其抗氧化活性的研究眥的25mg／ml的粗多糖溶液)，S8樹脂對(duì)粗多糖溶液的脫色率、蛋白去除率和多糖保留率分另q為846％、917％和813％。經(jīng)S8樹脂脫色脫蛋白后的粗多糖樣品依次使用DEAE52和SephadexG100進(jìn)行分

2、級(jí)純化后主要得到兩個(gè)組分(EPS1和EPS2)，根據(jù)SephadexG100純化后的多糖干重和DEAECellulose52柱層析前的粗多糖干重的比例可知，EPS1和EPS2的得率分別為536％和48％。在高效液相色譜上，EPS1和EPs2均顯示單一和對(duì)稱的色譜峰，分子量分別為122106和869105Da。此外，h反應(yīng)、CTAB反應(yīng)、僅萘酚反應(yīng)和蒽酮反應(yīng)均證明樣品中多糖的存在。3通過多種方法對(duì)EPS1和EPS2的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了測(cè)定對(duì)多

3、糖的紫外掃描結(jié)果表明EPS1和EPS2在200—400rim的波長(zhǎng)范圍內(nèi)無最大吸收。單糖組成分析的結(jié)果表明EPS1和EPS2均是由甘露糖、果糖乖葡萄糖組成的，其單糖組成(甘露糖：果糖：葡萄糖)的摩爾比分別為259：2983：1和423：3659：1。紅外光譜分析EPS1和EPS一2的紅外光譜圖基本相似：3422cm1處的峰是多糖oH鍵的伸縮振動(dòng)峰；2936cm1處的峰是多糖cH鍵的伸縮振動(dòng)峰，同時(shí)，可以看到在2936on1處有兩個(gè)吸收峰

4、，進(jìn)一步說明了果糖基的存在；在1500和1200cm1之間存在的峰對(duì)應(yīng)于CH鍵的變角振動(dòng)峰；而1128和1014cm1之間存在的峰對(duì)應(yīng)多糖骨架C_oc和C_o_H的伸縮振動(dòng)峰，同時(shí)，在1100爭(zhēng)1010cm1之間僅有兩個(gè)吸收峰，進(jìn)一步證明了EPS1和EPS2主要是由呋喃糖組成的；在926cm1處的吸收峰是由果糖基的吡喃環(huán)的伸縮振動(dòng)引起的；811cm1處的峰是甘露糖殘基的特征吸收峰。高碘酸氧化Smith降解的結(jié)果說明EPS1和EPS2中的

5、葡萄糖和甘露糖基不合有l(wèi)_3和1_4連接的糖苷鍵。甲基化反應(yīng)和氣質(zhì)聯(lián)用分析的結(jié)果說明，EPS1和EPS2均是由(2_6)連接的DD果糖基構(gòu)成的主鏈，以及位于支鏈末端的果糖基和甘露糖基，而少量的葡萄糖基則一般位于主鏈的末端而“C核磁共振的結(jié)果表明EPS1和EPS2均是由(2_6)一連接的pD果糖基的主鏈，和位于果糖基1位的甘露糖和葡萄糖基的支鏈構(gòu)成的典型的果聚糖結(jié)構(gòu)，且EPS1和EPS2的分支度分別為10％和13％。而剛果紅反應(yīng)的結(jié)果表明

6、，兩種多糖都不含有三螺旋結(jié)構(gòu)4外抗氧化實(shí)驗(yàn)說明，胞外多糖具有較弱的還原能力和鐵離子還原力；中等的H202清除能力、DPPH自由基清除能力和脂質(zhì)體過氧化抑制效果；較強(qiáng)的超氧自由基清除能力、羥基自由基清除能力和金屬離子的螯合能力多糖樣品的體外抗氧化活性的順序?yàn)榇侄嗵荅PS2EPS1。體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)說明，給由D一半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠灌胃胞外多糖可以有效地提高小鼠的脾指數(shù)和肝臟指數(shù)，從而增強(qiáng)小鼠的免疫功能。此外，給衰老小鼠灌胃胞外多糖還能有效地