25792.枯草芽孢桿菌木糖代謝基因的去調(diào)控及表型效應

1、枯草芽孢桿菌木糖代謝基因的去調(diào)控及表型效應DeregulationofgeneresponsibleforxyloseJ■●●●n■■●●1●metabonSmln上彳aclllussu勿t／lZSancIitsphenotypiceffects學科專業(yè)：生物化工研究生：孟媛指導教師：班睿副教授天津大學化工學院二零一零年7弋月一奄一奄年、月佃_趴I幺摘要使用木質(zhì)纖維素降解物作為工業(yè)發(fā)酵的原料，具有優(yōu)化資源利用，保護環(huán)境，避免工業(yè)與人爭糧

2、等優(yōu)勢，是目前最重要的技術發(fā)展趨勢之一。采用目前最廉價和最有效的技術方法處理木質(zhì)纖維素，所獲得的產(chǎn)物是含有各種戊糖和己糖混合糖液，其中以木糖和葡萄糖為主。由于大多數(shù)工業(yè)微生物都不能利用木糖，或者不能進行木糖和葡萄糖共代謝，限制了木質(zhì)纖維素降解物作為工業(yè)發(fā)酵原料的實際應用。本文對枯草芽孢桿菌的木糖代謝相關基因進行了遺傳改造，為改善枯草芽孢桿菌的木糖代謝進行了初步探索。構(gòu)建了用于同源重組敲除丑subtilis168菌株araE基因的重組質(zhì)粒

3、TAEE，經(jīng)轉(zhuǎn)化Ecolitopl0進行了質(zhì)粒的克隆和驗證。用質(zhì)粒TAEE轉(zhuǎn)化168菌株感受態(tài)細胞，用紅霉素抗性平板篩選到了轉(zhuǎn)化子。經(jīng)提取染色體進行PCR擴增和酶切電泳驗證，顯示抗性基因片段正確插入到了araE基因內(nèi)的預定位點，獲得了araE基因缺陷菌株168araE。構(gòu)建了用于同源重組敲除Bsubtilis168C菌株w坎基因的重組質(zhì)粒TXC，經(jīng)轉(zhuǎn)他colitopl0進行了質(zhì)粒的克隆和驗證。用質(zhì)粒TXC轉(zhuǎn)化168C菌株感受態(tài)細胞，用氯

4、霉素抗性平板篩選到了轉(zhuǎn)化子。經(jīng)染色體PCR驗證和酶切電泳驗證，顯示抗性基因片段正確插入到了xylR基因內(nèi)的預定位點，獲得j“afar和xylRY雙基因缺陷的重組菌株168CxylR’。分別比較了Bsubtilis168、168araE“、168C和168CxylR。菌株在不同培養(yǎng)基上的生長狀態(tài)。在葡萄糖或木糖為碳源的固體基本培養(yǎng)基上，四株菌的生長沒有區(qū)別，生長24h，茵落直徑小于lmm。在液體基本培養(yǎng)基上，四種菌的生長速率和最大生物量有