45328.釀酒酵母saccharomycescerevisiae與酒酒球菌oenococcusoeni的跨界融合子研究

1、摘要原生質體融合技術始于上世紀60年代，目前已經廣泛應用于動植物和微生物各個領域。該技術可以克服細胞壁的天然屏障，排除接合型的限制，實現多基因重組還可打破親緣關系，有目的地采用生產性狀優(yōu)良的菌株作為親本，來選育理想的融合株，從而加速工業(yè)微生物菌種改良進程，為優(yōu)良工業(yè)微生物的選育提供了一個嶄新的途徑。本研究是針對西北農林科技大學葡萄酒學院獲得的釀酒酵母(sa“haron砂℃escerevisiae)與酒酒球菌(Oenococ姍oeni)s

2、D一Za的跨界融合子F一20一7進行了一系列分析鑒定工作，來證明其是否為二親本的跨界融合子，并對其遺傳穩(wěn)定性和其他生產性能做進一步研究，為生產推廣提供理論依據。主要研究內容包括:1.對融合子進行生長試驗，發(fā)現其生長過程中延滯期稍長于葡萄酒酵母1450，對數生長期變短，與親本葡萄酒酵母1450幾乎同時達到穩(wěn)定期。2.對融合子進行抗生素的抗性分析，得出F一20一7對氨節(jié)青霉素不敏感，對放線菌酮比較敏感，抑制劑量為100肚gimL，說明融合子

3、F一20一7的遺傳物質主要以葡萄酒酵母為主。3.通過降酸試驗得到融合子F一20一7的平均降解蘋果酸效率為68.54%，最高者可達到78.81%，說明融合子的降酸性能不穩(wěn)定。4.導致蘋果酸降解發(fā)生的關鍵酶基因是蘋果酸一乳酸酶基因(mleA)和蘋果酸通透酶基因(mle尸)。本研究首先對融合子的核DNA進行該基因的PCR擴增，結果未找到該基因進而對質粒DNA進行PCR擴增，發(fā)現mleA和腳le尸，并且測序得到mle尸基因與Genbank中該酶

4、基因的同源性高達97%，較好的解釋了融合子的降酸行為。通過以上工作我們證明了跨界融合的發(fā)生，但是由于相關基因未能融合到核DNA上而只存在于細胞器中，所以造成了遺傳性質的不穩(wěn)定。因此需要篩選降酸效率高的融合子應用于生產，本研究中得到了一株降酸性能高達78，81%的融合子，可以分離保存?zhèn)溆?。關鍵詞:融合子降酸葡萄酒酵母酒酒球菌greatdegradationofL一alatecanbewellexPlainedInaword，weProve

5、dthehappenedofthefusionbetweeninterkingdomsaccordingtothisstudy.ButduetothegenewasonthePlasmid，IeadtotheinstabilityofitsdescendiblitySoweneedtoselecttheeficiencyfusant.Inthisstudyweobtainedastrainwhichcoulddegradethemali